Cistanche deserticola kvaliteedikontrolli meetodid

lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei jt.

Traditsiooniline hiina meditsiinCistancheon mahlakas varsCistanche deserticolaYC Ma või Cisanche tubulosa (Schenk) Wight kuivade ketendavate lehtedega. Sellel on neeru yangi toniseerimine, essentsi ja vere toitmine, soolte niisutamine ja lahtistid jne. Seda kasutatakse peamiselt neeru-yangi puudulikkuse, essentsi ja vere puuduse, impotentsuse ja viljatuse, talje ja põlvede valulikkuse ja nõrkuse, nõrkuse korral. lihased ja luud, soolestiku kuivus ja kõhukinnisus. Kaasaegsed farmakoloogilised uuringud näitavad sedaCistanchesellel on palju funktsioone, nagu seksuaalfunktsiooni parandamine, Alzheimeri tõve ja Parkinsoni tõve vastu võitlemine, õppimis- ja mäluvõime parandamine, vananemisvastane, väsimusevastane, maksa kaitsmine ja lahtistav toime [4]. Suur hulk uuringuid on kinnitanud, et fenüületanoidglükosiididCistanche deserticolaneil on ilmne mõju õppimis- ja mäluvõime parandamisele, vastupanuvõimele Alzheimeri tõvele ja Parkinsoni tõvele (4, oligosahhariididel ja polüoolidel on lahtistav ja lahtistav toime 64 ). "Hiina Rahvavabariigi farmakopöa" mõõdab ainult fenüületanoidglükosiidide ehhinakosiidi ja verbaskosiidi sisaldustCistanchedeserticola, kuid ei mõõda selle lahtistava toime aktiivseid komponente, mistõttu on raske saavutada terviklikku analüüsiCistanchedeserticola. Kvaliteedi kontroll. Selle piirangu ületamiseks ja mitme indeksiga kvaliteedihindamise süsteemi loomiseks, mis on seotud peamiste funktsioonide ja näitajatega.Cistanchedeserticola, kasutati selles uuringus HPLCELSDP4, et luua kvantitatiivne analüüsimeetod betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi jaoksCistanchedeserticola. Lisaks 58 partiidCistanchedeserticolaerineva päritoluga ravimmaterjalid ja 10 partii ravimmaterjaleCistancheXinjiangi Hotani piirkonnas testiti, mis võib olla võrdlusaluseks meditsiinimaterjalide igakülgseks kvaliteedikontrolliks ja hindamiseks.Cistanchedeserticolatulevikus.

Tsüstanche ekstrakti eelised toodetele klõpsake

1 Instrument ja reaktiivid

1.1 Instrumendid

Sartoriuse elektrooniline kaal BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia; ALLTECH 2000ES aurustuva valguse hajumise detektor (EISD); Ultrasonic Cleaner KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Reaktiivid

Kontrollaine: betaiin (partii: {{0}}, puhtus: 99,2 protsenti), mannitool (partii: 10053-201304, puhtus: 99,0 protsenti), D-fruktoos (partii: 111504-201703) , puhtus: 99,8 protsenti ), D – veevaba glükoos (partii number: 110833-201506, puhtus: 99,9 protsenti), sahharoos (partii number: 111507-201303, puhtus: 99,8 protsenti), kõik ostetud Hiina riiklikust instituudist toidu- ja ravimikontrolli jaoks.

Meditsiinilised materjalidCistanchedeserticolakoguti Sise-Mongoolias, Xinjiangis, Gansus ja mujal, kokku 58 partiiga. Pekingi ülikooli farmaatsiakooli professor Tu Pengfei tuvastas need kui kuivatatud lihavad varred.CistanchedeserticolaLidangaceae taime YCMa, nagu on näidatud tabelis 3.

Meditsiinilised materjalidCistanchedeserticolakoguti Xinjiangis Hotani piirkonnas kokku 10 partiina. Pekingi ülikooli farmaatsiakooli professor Tu Pengfei tuvastas need kui Liedangaceae taime Cistanche tubulosa (Schenk) Wight kuivatatud lihavad varred, nagu on näidatud tabelis 4.

1.3 Reaktiivid

Atsetonitriil on kromatograafiliselt puhas (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), metanool on kromatograafiline (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.) ja vesi on ülipuhas vesi.

2 Meetodid ja tulemused

2.1 Kromatograafilised tingimused

Kromatograafiliseks kolonniks oli ShodexAshaipak NH2P-50 4E polümeer-geelkolonn (250 mm × 4,6 mm, 5 μm); liikuv faas oli atsetonitriil-vesi (77°23); voolukiirus oli 0,7 ml·min{11}}; kolonni temperatuur oli 25 kraadi; Valguse hajumise detektor (ELSD): triivtoru temperatuur oli 100 kraadi ja kandegaasi voolukiirus oli 3 L·min{15}}.

2.2 Võrdluslahuse valmistamine

Võtke sobiv kogus betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi võrdlusainet, kaaluge see täpselt, lisage vesi, et saada segalahus, mis sisaldab 0,25 mg betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi kohta. 1 ml, loksutage korralikult ja võtke.

2.3 Uuritava lahuse valmistamine

Võtke umbes 1.0 gCistanchemeditsiiniline pulber (läbi sõela nr 4), kaaluge see täpselt, pange 100 ml pruuni mõõtekolbi, lisage täpselt 50 ml 50% metanooli, sulgege see tihedalt, loksutage, kaaluge leotage seda 30 minutit ja seejärel ultraheliga (võimsus 250 W, sagedus 35 kHz) 40 minutit, võtke see välja, laske jahtuda, kaaluge uuesti, lisage massi vähendamiseks 50 protsenti metanooli, loksutage korralikult ja laske. see seisab. Aspireerige täpselt 5 ml supernatanti, asetage see 25 ml mõõtekolbi, lahjendage märgini 50% metanooliga, loksutage korralikult ja filtreerige läbi 0,2 μm mikropoorse membraani.

2.4 Määramismeetod

Tõmmake täpselt vastavalt 5 ja 10 μL võrdluslahust ja 5 μL uuritavat lahust, süstige need vedelikkromatograafi, registreerige piigi pindala ja arvutage välisstandardi kahepunktimeetodi logaritmilise võrrandi järgi.

2.5 Süsteemi sobivuse test

Vastavalt punktis 2.1 esitatud kromatograafilistele tingimustele tõmmake täpselt 5 μ võrdluslahust ja uuritavat lahust ning süstige need kõrgsurvevedelikkromatograafiasse, mõõtke ja registreerige kromatogramm, nagu on näidatud joonisel 1. Kromatograafilised piigid katseproovi retentsiooniaeg oli sama kui võrdlusaine kromatograafilised piigid, lahutusvõime oli hea ja kromatograafilised tingimused olid teostatavad.

Märkus: A. Kontrollaine; B.Cistanchenr 49 näidis; 1. betaime ; 2. fnuckese ; 3. mannibool ; 4. glükoos ; 5. sucreve

Joonis 1 Võrdlusaine ja Cistanche nr 49 proovi HPLC profiilid

2.6 Lineaarsete seoste uurimine

Võtke võrdlusainetena sobivas koguses betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi, kaaluge need täpselt ja lisage vett, et iga 1 ml sisaldaks betaiini 0.496 0 mg, mannitool {{3} }.994 0 mg, puuviljad 1.0126 mg, glükoos 1.0882 mg ja sahharoos 0,9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0,9920, 1,9840, 2,9760 μ, mannitool 0,1988, 0,4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 μ, fruktoos 0,5063, 1.012 6. 2.{40}}. 4.{42}}. 5.{44}}. Kromatograafilised tingimused süstiti ja tuvastati ning piigi pindala registreeriti; seejärel kasutati abstsissina iga võrdlusaine süstitava koguse logaritmi väärtust X (ug) ja piigi pindala logaritmi väärtus Y oli ordinaat ning joonistati standardkõver. Tulemused on toodud tabelis 1.

Tabel 1 Lineaarse seose uurimise tulemused

2.7 Täpsuskatse

Tõmmake uuritav lahus (proov nr 49) täpselt ülaltoodud kromatograafilistes tingimustes, süstige pidevalt 6 korda, mõõtke iga kromatograafilise piigi piigi pindala ja arvutage selle RSD väärtus. Tulemused Betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi piikide alade RSD-d olid vastavalt 0,84 protsenti, 2,56 protsenti, 1,27 protsenti, 2,62 protsenti ja 1,52 protsenti, mis näitab, et kasutatud instrumendi täpsus on see uuring oli hea. 2.8 Korratavuse test

Võtke 6 prooviCistanchedeserticola(proov nr 49), valmistatakse katselahus vastavalt punktis 2.3 kirjeldatud meetodile, mõõdetakse iga kromatograafilise piigi piigi pindala ja arvutatakse vastav sisaldus. Tulemused Betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi (n=6) keskmine sisaldus oli 7,93 protsenti, 7,27 protsenti, 8,74 protsenti, 2,75 protsenti ja 4,81 protsenti ning RSD-d 2,83 protsenti, {{94 protsenti 18}},97 protsenti ja 2,60. protsenti , 1,40 protsenti , mis näitab, et meetodil on hea korratavus. 2.9 Stabiilsuskatse

Võtke testlahus (proov nr 49), süstige see 0, 4, 8, 12, 16 ja 24 tundi pärast mõõtmiseks ettevalmistamist ning arvutage iga kromatograafilise piigi RSD väärtus. Tulemused Betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi RSD-d olid vastavalt 0},61 protsenti, 1,92 protsenti, 1,34 protsenti, 2,83 protsenti ja 0,69 protsenti, mis näitab, et katselahus oli hea. stabiilsus 24 tunni jooksul. 2.10 Taastumise test

Võtke 6 prooviCistanchedeserticolateadaoleva sisaldusega (proov nr 49), kaaluge täpselt 0,25 g, pange need 50 ml pruuni mõõtekolbi ja tõmmake täpselt 25 ml segatud võrdluslahust kontsentratsiooniga 1: 1 (mis sisaldab {{10}},7900 mg betaiini). Proovile lisati mL-, fruktoosi 0,7236 mg"mL-1, mannitooli 0,8812 mg-mL-1, glükoosi 0,2708 mg/mL-1, sahharoosi 0,4883 mg"mL-'), ja katselahus valmistati vastavalt punktis 2.3 toodud meetodile. Tuvastati vastavalt ülalmainitud kromatograafilistele tingimustele, arvutati selle saagis, tulemused on toodud tabelis 2, mis näitab, et meetod on hea täpsusega.

Tabel 2: 5 testitava komponendi proovi taastumise määra mõõtmistulemused (n=6)

3 Arutelu

3.1 Indeksi komponentide valik

Oligosahhariidide koguarvCistancheon selle tõhusad osadCistanchelahtistite jaoks. Autor analüüsis selle osa keemilist koostist LC-MS ja võrdlusaine abil ning tegi kindlaks, et see osa koosneb peamiselt betaiinist, mannitoolist, fruktoosist, glükoosist ja sahharoosist. Seetõttu valiti need 5 komponenti indeksi komponentideksCistanchedeserticolaja sisu määramise meetod loodi.

3.2 Kromatograafiliste kolonnide valik

Viis testitavat komponenti, betaiin, mannitool, fruktoos, glükoos ja sahharoos, on suhteliselt polaarsed ja neid ei saa hoida pöördfaasi Cn kolonnis. Tavaliselt ilmuvad piigid 1-2 minuti jooksul ja komponente ei saa eraldada. Aminokolonnid Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) ja Phenomenex Bondclone 10 NH (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) suhkru ja polüoolide eraldamiseks ning polümeeripõhised aminokolonnid Prevail Carbohydrate ES ( 250 mm × 4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm × 4,6 mm, 5 μm). Tulemused näitavad, et polümeermaatriksi aminokolonn suudab need viis komponenti tõhusalt eraldada.

3.3 Anduri valik

Viiel testitaval komponendil puudub ilmselge UV-neeldumine ja UV-detektori sisaldust ei saa otseselt määrata. Seetõttu loodi selles artiklis suhkrualkoholi komponentide kvantitatiivne analüüsimeetodCistanchedeserticolakasutades HPLC-EISD-d. Tulemused näitavad, et meetodil on kõrge tundlikkus, hea korratavus ja suur täpsus ning seda saab kasutadaCistanchedeserticolaja muud betaiini ja suhkrualkohole sisaldavad meditsiinilised materjalid.

3.4 Katselahuse valmistamismeetodi uurimine

Võrreldi erinevaid ekstraheerimislahusteid, sealhulgas vett, 30 protsenti metanooli, 50 protsenti metanooli, 70 protsenti metanooli, metanooli jne. Tulemused näitasid, et peale 70-protsendilise metanooli ja metanoolilahusti veidi madalama ekstraheerimiskiiruse ei olnud teiste lahustite puhul olulist erinevust, mistõttu tehti otsene valik. Lahustina kasutati punktis "Sisu määramine" 50% metanooliCistancheHiina Rahvavabariigi farmakopöas ja see valmistati vastava katselahuse valmistamismeetodi järgi ning seejärel lahjendati 5 korda suhkrualkoholi komponentide määramiseks.

3.5 Erinevate alustega proovide tuvastamine ja analüüs

Selles uuringus sisaldub 5 komponendi 58 partiisCistanchedeserticolaja 10 partiidCistanchedeserticolamäärati ravimaterjalid. Betaiini, mannitooli, fruktoosi, glükoosi ja sahharoosi massifraktsioonid 58 partiisCistanchedeserticolaproovid olid 2,73 protsenti -17,65 protsenti , 2,46 protsenti -16,34 protsenti , 2,52 protsenti {{10}},74 protsenti , 0,97 protsenti -14,06 protsenti , 3,15 protsenti -27,16 protsenti ; Mannitooli, fruktoosi ja glükoosi sisaldus oli 1.00 protsenti -13,04 protsenti, 2,98 protsenti -8,85 protsenti, 1,09 protsenti -5,33 protsenti 10 partiist.Cistancheproove ning betaiini ja sahharoosi ei tuvastatud. Ravimmaterjalide sisaldus on partiide lõikes väga erinev ning järgimiseks ei ole reeglit, mis viitab vajadusele kehtestada ravimmaterjalide kvaliteedi kontrollimiseks sisu määramise standard. Lisaks saab selle meetodi abil tõhusalt eristada kahte tüüpiCistanchealustaimed, nimeltCistancheei sisalda betaiini ja sahharoosi, samas kui nende kahe komponendi sisaldus on suuremCistanche deserticola. See annab aluse ka kahe ravimmaterjali tekstuuri ja elupaiga erinevuste analüüsimiseksCistanche deserticola. Võrreldes ravimmaterjaligaCistanche deserticola, tekstuur on pehmem ja see on kohapeal tuntud kui "Soft Dayun", samas kuiCistanchenimetatakse "Chai Dayuniks", kuna see sisaldab sahharoosi (3,15–27,16 protsenti). ).Cistanche deserticolalevitatakse peamiselt Alxas Sise-Mongoolias, samasCistanchelevib peamiselt Xinjiangi Hotani piirkonnas, kus temperatuur on kõrgem kui Alxa piirkonnas, ja kohalikus piirkonnas kasutatakse sageli tilkniisutust, kuid kui temperatuur langeb,Cistanchesaab tõsist kahju. Külmumiskahjustusel on ühelt poolt teatav seos selle kõrge veesisaldusega, teisalt on see seotud selles sisalduvate koostisosadega. Betaiin 243 on oluline osmootset reguleeriv aine, mis mängib olulist rolli taimede stressikindluse suurendamisel, nagu vastupidavus soolsusele, põuale, madalale temperatuurile ja tugevale valgusele. Seda just selles sisalduva kõrge betaiini sisalduse tõttuCistanche deserticolaet see talub paremini soola-leelist, põuda ja külmumiskahjustusi kuiCistancheja selle levik on suhteliselt lai.

3.6 AnalüüsCistanchedeserticolaerineva päritoluga proovid

58 kõrbepartii hulgascistancheravimmaterjali proovid, 45 partiid toodeti Alxa League'ist Sise-Mongooliast, 3 partiid olid pärit Wangyedist (Dengkou maakond), Sise-Mongooliast ja 1 partii oli teadmata. Kõik 49 ravimipartiid olid erineva 5 komponendi sisaldusega. Olulist vahet siiski pole. Analüüsi põhjuseks võib olla see, et kõik ravimmaterjalid on toodetud samal kõrbealal, ökoloogia ja geograafiline keskkond on sarnased ning toote kvaliteet on suhteliselt ühtlane ja stabiilne. Gansus Minqini maakonnas toodetakse 3 partiid ja Xinjiangist 6 partiid. Joonisel 2 toodud analüüsi kohaselt kajastub Sise-Mongoolias toodetud ravimmaterjalidega võrreldes peamine erinevus fruktoosi ja sahharoosi sisalduses. Ravimaterjalide sahharoosisisaldus oli suhteliselt kõrge, kuid arvestades kahe päritoluga proovide väikest kogust, tuleb seda järeldust kontrollida rohkemate proovide kogumisega. 3.7 Kokkuvõte

Selles uuringus loodi HPLC Wang ISD lahtistite 5 toimeaine samaaegseks määramiseks, mis pakkus mugavamat, tõhusamat ja täpsemat meetodit kõhukinnisuse kvaliteedi kontrollimiseks.Cistanche deserticolaning andis aluse kvaliteedistandardi parandamiseks ja edasiarendamiseksCistanchedeserticola. tähenduslik viide.

Viited

【1】 Riiklik Farmakopöa Komisjon. Hiina Rahvavabariigi farmakopöa: A 【M】. Peking: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015;135.

【2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Teadustöö edusammud farmakoloogilise aktiivsuse kohtaCistancheNäitus. Hiina taimne meditsiin, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Xue Haiyan. Jiao Danyuan, Yao Jun. Cilantro koguglükosiidide farmakoloogiliste mõjude uurimine [J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4): 486-488.

【4】 An Chunna, Zhang Hongning, Pu Xiaoping. Neurofarmakoloogia uurimistöö edenemineCistanche deserticolaNäitus [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46(12): 887-890.

【5】 Gao Yuhong, Ke Zunji. Edusammud ravimi farmakoloogiliste mõjude kohtaCistanche deserticolaAlzheimeri tõve ravis []. Shanghai Traditsioonilise Hiina meditsiini ajakiri, 2018, 52(1): 109-112.

【6】 Zhang Baishun, Zhao Xuewen, Chen Shuanghou jt. Eraldatud osade lahtistav toimeCistanche deserticolaEksperimentaalsed uuringud □. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10(1I1): 31-32.

【7】 Zhang Baishun, Chen Shuanghou, Zhao Xuewen jt.Cistanche deserticolagalaktitooli ekstrakt Doosi-vastuse uuring väljaheite toime kohta [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10 (12): 28-29.

【8】 Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang jt. Ravimite uurimineCistanche deserticolalahtistite jaoks Uurimine [J]. Kaasaegne Hiina meditsiin Hiinas, 2015, 17(4): 307-311.

【9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong jt. Kolm tegevustCistanche deserticolaerinevate mõjutegurite all Komponentide kvantitatiivne analüüs J. Chinese Herbal Medicine, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong jt. MääramineCistanche deserticolaHPLCEISD poolt Galactitol sisu. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan jt. HPLCELSD määramineCistancheja toru Galaktitooli sisaldus inCistanche[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 19(8): 52-54.

【12】 Wang Guiping, Xue Xiaomin, Lu Chao jt. Betaiini mõju taimede stressiresistentsuse parandamisele ja selle toimemehhanism. Jiangxi Agricultural Journal, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Wang Qingjie, Wang Li. Ülevaade taimede külmakindluse geenide uuringutest. Maamajandus ja tehnoloogia, 2018, 29(8): 23-25.