Cistanche Tubulosa kaitseb dopamiinergilisi neuroneid apoptoosi ja gliiarakkudest pärineva neurotroofse faktori reguleerimise kaudu: in vivo ja in vitro-Ⅱ

Käitumistestid

Ujumiskatse (Zhu et al., 2014)

Keha liikumise koordineerimist hiirtel mõõdeti ujumistestiga. Hiired paigutati eraldi veepaaki (kõrgus 25 cm ja läbimõõt 10 cm), mis sisaldas 10 cm vett, ja testiti vaikses keskkonnas, et registreerida nende paigaloleku kestus 5 minuti jooksul.

Avatud väli test (Kawai et al., 1998)

Lokomotoorset aktiivsust mõõdeti avatud välja testi abil. Hiiri testiti vaikses ja nõrgalt valgustatud keskkonnas ning paigutati individuaalselt 30 cm × 30 cm × 15 cm läbipaistvasse akrüülmahutisse, mille põhjas oli 6 cm × 6 cm eraldusvõrk. Hiirtele anti 10 minutit keskkonnaga kohanemiseks ja seejärel mõõdeti viis korda järjest üksikute hiirte ruudustiku arvu ja kasvatussagedust, et saada keskmisi väärtusi.

LOODUSLIK TUBULOOS SUGUFUNKTSIOONI PARANDAMISEKS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Ajukoe proovide võtmine

Enne koeproovide võtmist toideti hiiri ad libitum vaba juurdepääsuga veele ja neile manustati ravimit 14 päeva järjest. Igast rühmast valiti välja neli hiirt ja nad peatati kiiresti. Iga looma SN (Bregma: -2,75 mm -2,92 mm) eraldati ja asetati jääle. Ajukude loputati 0,9% jääkülma naatriumkloriidi lahusega, et eemaldada veri, ja kuivatati filterpaberil enne säilitamist temperatuuril –80 °C. Igast rühmast neli hiirt anesteseeriti intraperitoneaalselt ja nende rindkere avati. Seejärel sisestati iga looma vasakusse vatsakesse infusiooninõel. Vere eemaldamiseks vereringesüsteemist lõigati parempoolne kodade lisand ja loomale infundeeriti 4 °C tavalist soolalahust, kuni maks muutus kahvatuks, et tagada järjestikune perfusioon. Kui parema aatriumi väljavool oli selgeks saanud, perfuseeriti iga loom 4% paraformaldehüüdfiksaatoriga. Pärast perfusiooni lõigati iga looma ajukude hoolikalt lahti ja fikseeriti 4% paraformaldehüüdis 24 tundi. Fikseeritud ajukude loputati seejärel jooksva vee all, dehüdreeriti etanoolilahustes ja puhastati ksüleenilahuses. Sellele järgnes parafiini kastmine ja kinnistamine.

HPLC-ga mõõdetud DA koguse muutused

Iga rühma nanopulbristatud SN pandi jäävanni, mis sisaldas 0,9% naatriumkloriidi lahust (suhe 1:9). Ajukude homogeniseeriti ultraheli raku lõhkujaga ja tsentrifuugiti kiirusel 1200 p/min 20 minutit temperatuuril 4 °C, et saada supernatant. HPLC jaoks kasutati Hypersil AA-ODS kolonni (2,1 mm × 200 mm, 5 µm) kolonni temperatuuril 30 °C. Fluorestsentsi tuvastamine viidi läbi lainepikkustel 280 nm λex ja 340 nm λem. Süstimismaht oli 10 µl.

TH, GDNF, GFR 1 ja Ret ekspressioon tuvastati immunohistokeemia abil

Igalt loomalt eraldati üksikute ajukoe parafiinilõigud (paksused 5 µm) ja asetati 40◦C sooja veevanni klaasplaatide tasandamiseks ja kleepimiseks. Kõiki koeslaide inkubeeriti 60 ◦C ahjus 3–6 tundi, millele järgnes ksüleeni vahatustamine, etanooli dehüdratsioon gradiendiga ja antigeeni otsimine, inkubeerides sidrunhappe puhvris ja kuumutades mikrolaineahjus 20 minutit. Seejärel inkubeeriti koeslaidid 3% H2O2 lahuses toatemperatuuril 10 minutit. Pärast kolm korda PBS-s pesemist inkubeeriti koeslaidid normaalse seerumiga suletud kambris toatemperatuuril 20 minutit. Immunohistokeemiline värvimine viidi läbi vastavalt tootja juhistele. Positiivselt värvitud rakkude integreeritud optilise tiheduse väärtuse arvutamiseks kasutati Motic Med 6.0 pildianalüsaatorit.

Western blot analüüs hiirte ajukudedes

Selles uuringus hinnati türosiinhüdroksülaasi (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 ja Baxi valgu ekspressiooni. Iga rühma ajulüsaati homogeniseeriti 3{{10}} minutit jääl, millele järgnes tsentrifuugimine madalal temperatuuril, 20, 000 pööret minutis 4 ◦C juures. 5 minutit supernatandi kogumiseks. Valguproovid eraldati konstantse rõhu all, kasutades 10% SDS-PAGE geeli, nagu ülalpool kirjeldatud. Primaarne antikeha kontsentratsioon: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml ja Bax 0,11 mg/ml. Protseduur oli sama, mis eespool.

LOODUSLIK CISTANCH TUBULOSA VANANEMISVASTANE ALŽEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Statistiline analüüs

Selles uuringus kasutati andmete töötlemiseks ja analüüsimiseks SPSS 20.0 statistilist tarkvara. Parameetrite väärtused väljendati kui keskmine ± standardhälve (¯x ± S). Ühefaktorilise andmeanalüüsi jaoks kasutati ANOVA-d. Rühmade võrdlemiseks kasutati LSD-d või Games-Howelli testi. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

TULEMUSED

C. tubulosa nanopulbri aktiivsed komponendid

Skaneerimise vahemikus 200–400 nm oli C. tubulosa ECH ja 330 nm VER maksimaalne neeldumispiik, mis ilmnes 20 minuti jooksul. ICA-l olid maksimaalsed neeldumispiigid 270 nm juures ja need ilmnesid 20 minuti pärast (joonis 1A). Tulemused näitasid, et negatiivsed proovid ei seganud tuvastamist (joonis 1B). Proovidel ja kontrollil olid samad kromatograafilised piigid ja negatiivsel proovil puudusid. See näitas, et teised proovi koostisosad ei seganud mõõdetavat komponenti. Lisaks võivad kolm komponenti ja külgnevad piigid jõuda eraldumise algtasemeni ja eraldusaste oli suurem kui 1, 5.

C. tubulosa nanopulbriga vähendatud MPP{0}}indutseeritud tsütotoksilisus MES23.5 rakkudes

MES23.5 rakkude elujõulisus vähenes oluliselt MPP+ kontsentratsioonide suurenemisega. Joonisel 2F on näidatud MPP+ erinevate kontsentratsioonide oluline tsütotoksilisus.

C. tubulosa nanopulber vähendas MPP{0}}indutseeritud tsütotoksilisust ja suurendas MES23.5 rakkude elujõulisust. Joonis 2G näitab, et C. tubulosa nanopulbri annused 10–250 µg/mL avaldasid MPP+--ga töödeldud MES23.5 rakkudele annusest sõltuvat kaitsvat toimet.

C. tubulosa nanopulbri tsütomorfoloogiline toime

Normaalsetel MES23.5 rakkudel oli hea rakuadhesioon ja need olid spindlikujulised, selgete rakupiiride ja sünapsidega. MPP+-kahjustatud MES23.5 rakkudel ilmnes halb rakkude adhesioon ja kokkutõmbumine ning paljud jäid kokkutõmbunud sünapsidega söötmesse. Need rakud agregeeriti, kahanesid ja ümmargused koos vakuoolidega ning tuumad lagunesid või lagunesid. C. tubulosa nanopulber erinevates annustes parandas MES23.5 rakkude tsütomorfoloogiat erineval määral, parandades raku adhesiooni ja kandjarühma sünaptilist kliirensit. MES23.5 rakud C. tubulosa suure annusega ravirühmas näitasid morfoloogiat, mis sarnanes normaalse kontrollrühma omaga (joonised 2A–E).

C. tubulosa nanopulbri mõju TH ekspressioonile ja apoptoosile rakkudes

Joonisel 3 on näidatud TH-valgu ekspressiooni oluline vähenemine kandjarühmas. TH valgu ekspressioon suurenes erinevalt rühmades, keda raviti erinevate C. tubulosa annustega. Kuid LSD test näitas, et kolme ravitud rühma vahel ei olnud olulist erinevust.

Joonisel fig 4 on näidatud voolutsütomeetria abil saadud apoptoosi hindamise tulemused. Apoptoosi määr kandjarühmas oli oluliselt kõrgem kui teistes rühmades. Erinevate C. tubulosa nanopulbri annustega töödeldud rakkude apoptootilise kiiruse langus oli erinev võrreldes kandjarühmaga. Keskmise ja suure annusega C. tubulosa ravirühma rakkudel oli apoptootilise kiiruse paranemine kõige olulisem võrreldes teiste C. tubulosa ravirühmadega. LSD test näitas, et kahe ravitud rühma vahel ei olnud olulist erinevust, kuid oluline erinevus ka väikese annuse rühma vahel.

C. tubulosa nanopulbri mõju Bcl2/Bax valgu ekspressioonile rakkudes

Joonis 5 näitab, et Bcl2 valgu ekspressioon vehiikulirühma rakkudes oli normaalse kontrollrühmaga võrreldes oluliselt madalam. Seevastu Baxi valgu ekspressioon kandurirühma rakkudes oli oluliselt kõrgem kui normaalses kontrollrühmas. C. tubulosa ravirühmad näitasid suurenenud Bcl2 valgu ekspressiooni ja vähenenud Bax valgu ekspressiooni MPP+--ga töödeldud MES23.5 rakkudes. Kolme ravitud rühma vahel esines LSD testis olulisi erinevusi. Need toimed sõltusid annusest.

Käitumistestid

Ujumistesti tulemused näitasid, et vehiiklirühma hiirtel oli suhteliselt pikk paigalolekuaeg, mis aja jooksul suurenes. 14. päeval oli vehiiklirühma hiirtel statsionaarne kestus oluliselt pikem kui normaalse kontrollrühma hiirtel. Hiirte paigaloleku kestus

väike annusC. tubulosaravirühm ei erinenud oluliselt vehiiklirühma hiirte omast. Siiski oli hiirte statsionaarne kestus suure annusega C. tubulosa ravirühmas oluliselt lühem kui vehiiklirühma hiirtel.

Avatud väli testi tulemused viitavad sellele, et pärast MPTP-st põhjustatud kahjustusi hiirtel näitasid vehiiklirühma hiirte spontaanse aktiivsuse võime olulist langust, mida näitab üleskasvatamise sagedus. Pärast 14-päevast manustamistC. tubulosa nanopulber, oli mõõduka ja suure annusega ravirühmade hiirtel oluliselt kõrgem kasvamissagedus võrreldes vehiiklirühma hiirtega (joonised 6A, B).

C. tubulosa nanopulbri mõju DA sisaldusele hiirtel

Muutused SN-i DA-sisalduses määrati HPLC abil. Leiti, et DA sisaldus vehiiklirühma ajus oli oluliselt vähenenud. DA sisaldus PD hiirte ajus madala annusega C. tubulosa ravirühmas ei erinenud oluliselt vehiiklirühma hiirte omast. SiiskiC. tubulosa ravisuurendas DA taset PD hiirte ajus annusest sõltuval viisil. C. tubulosa suure annusega ravitud PD hiirte ajudes oli oluliselt kõrgem DA sisaldus kui vehiiklirühma hiirte ajus (joonis 6C).

C. tubulosa nanopulbri mõju TH ekspressioonile hiirtel

TH-positiivsete rakkude arv ja TH-valgu ekspressiooni tase MPTP-indutseeritud PD-hiirte SN-s olid kontrollrühma hiirtega võrreldes madalamad. Pärast C. tubulosa ravi suurenes TH-positiivsete rakkude arv ja TH-valgu ekspressioonitase MPTP-ga indutseeritud PD hiirte SN-s, kusjuures suure annusega C. tubulosa ravirühma ja vehiiklirühma vahel oli oluline erinevus. LSD testiga; ja kolme ravitud rühma vahel esines olulisi erinevusi (joonis 7).

C. tubulosa nanopulbri mõju GDNF ja selle retseptorite, GFR 1 ja Ret valgu ekspressioonile hiirtel

GDNF ja selle retseptorite GFR 1 ja Ret valgu ekspressiooni positiivselt värvunud rakkudes hinnati immunohistokeemia abil. Valgu ekspressioonitasemete hindamiseks erinevate hiirte rühmade SN-s kasutati Western blot analüüsi. Erinevate rühmade tulemused olid kahe tuvastamismeetodi kasutamisel sarnased. GDNF ja selle retseptorvalkude, GFR 1 ja Ret, ekspressioon vehiiklirühma hiirte SN-i positiivselt värvunud rakkudes oli oluliselt madalam kui normaalse kontrollrühma hiirtel. C. tubulosa ravi erinevad annused suurendasid GDNF-, GFR 1- ja Ret-positiivsete rakkude arvu (joonised 8A–S).

GDNF, GFR 1 ja Ret valgu ekspressioon vehiiklirühma hiirte SN-s oli oluliselt madalam kui kontrollrühma hiirtel. Ravi kontsentratsiooni suurendamineC. tubulosa nanovõimsussuurendas oluliselt nende valkude ekspressiooni. GDNF, GFR 1 ja Ret valgu ekspressioon hiirte SN-s C. tubulosa suure annusega ravirühmas oli oluliselt kõrgem kui vehiiklirühma hiirtel (P< 0.01; Figures 8T, U). 

C. tubulosa nanopulbri mõju Bcl2/Baxi valgu ekspressioonile hiirtel

Bcl2 valgu ekspressioon vähenes oluliselt ja Baxi valgu ekspressioon suurenes märkimisväärselt vehiiklirühma hiirte SN-is (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

ARUTELU

PD ja apoptoos

PD on neurodegeneratiivne haigus. Vastavalt Zhang jt. (2005), on levimus üle 55-aastaste Hiina elanikkonna hulgas 10,7% ja üle 65-aastaste seas 1,67%. PD-ga patsientide arv on globaalse vananemise kiirenemisega igal aastal kasvanud, pannes patsientide peredele suure rahalise koormuse. ja ühiskonda laiemalt. Ajus osalevad dopamiinergilised neuronid peamiselt DA sünteesis ja sekretsioonis. Need on laialt levinud kesknärvisüsteemis ja paiknevad peamiselt SN-s (80%). TH on DA sünteesi peamine kiirust piirav ensüüm. Seega vähendab TH aktiivsuse pärssimine DA sünteesi (Huot ja Parent, 2007). PD peamised patoloogilised ja biokeemilised muutused on dopamiinergiliste neuronite apoptoos SN-s, nigrostriataalse DA oluline vähenemine ja Lewy kehade moodustumine dopamiinergilistes neuronites (Dexter ja Jenner, 2013). PD etioloogia hõlmab seotud geneetilisi tegureid, keskkonnategureid ja närvisüsteemi vananemist (Allam et al., 2005). PD patogenees jääb tänapäeva meditsiinis ebaselgeks. Alates 1960. aastate lõpust on levodopa asendusravi edukalt kasutatud PD raviks ja seda on peetud oluliseks pöördepunktiks PD ravis. Selle teraapia pikaajaline rakendamine põhjustab aga kõrvaltoimeid ja teraapia ei ravi PD algpõhjuseid (Del Sorbo ja Albanese, 2008). Seetõttu on PD ravimisel ülioluline uute ravimite või ravimeetodite aktiivne uurimine, mis on suunatud dopamiinergiliste neuronite kaitsele.

Varasemates uuringutes näitas terminaalse desoksünukleotidüültransferaasi vahendatud dUTP hüüdotsa märgistamise rakendamine, et 0,6%–4,8% dopamiinergilistest neuronitest PD patsientide SN-s ilmnes apoptoos (Mochizuki et al., 1996). Elektronmikroskoopia näitas apoptootilisi tunnuseid, sealhulgas kromaatilist kondenseerumist ja apoptootilisi kehasid dopamiinergilistes rakkudes (Anglade et al., 1997). Tompkins et al. (1997) viisid läbi PD, AD ja difuusse Lewy kehahaigusega (DLBD) patsientide ajukoe lahkamiste ultrastrukturaalse analüüsi. Nad leidsid PD- ja DLBD-patsientidel SN-i tihedas kihis apoptootilisi kehasid, pakkudes veenvaid tõendeid neuronaalse apoptoosi kohta PD ja sellega seotud haiguste korral. Seetõttu on PD-ravi jaoks ülioluline apoptoosi vähendamine või pärssimine dopamiinergilistes neuronites.

Varasemad uuringud näitasid, et MPTP kutsus esile PD-laadsed sümptomid. MPTP läbib hematoentsefaalbarjääri ja metaboliseerub astrotsüütides B-tüüpi monoamiini oksüdaaside poolt. Seejärel muundatakse see mürgiseks MPP+-ks, mis akumuleerub dopamiinergiliste neuronite mitokondritesse DA transporteri valgu sissevõtmise kaudu. Seega tekitab see liigseid hapnikuvabu radikaale, mis pärsivad mitokondriaalse hingamisahela kompleksi I aktiivsust ja ATP sünteesi. Need sündmused soodustavad veelgi vabade radikaalide moodustumist ja oksüdatiivse stressi reaktsioone ning viivad lõpuks dopamiinergiliste neuronite degeneratsiooni ja surma. Seetõttu kasutati selles uuringus MPP+ in vitro kandja loomiseks MES23.5 dopamiinergilistes neuronites ja MPTP-d, et indutseerida vehiire vastastikuse kontrollimise jaoks. MTT testi tulemuste kohaselt vähendas MPP+ oluliselt MES23.5 rakkude elujõulisust, mis viitab sellele, et MPP+ oli dopamiinergiliste neuronite suhtes tsütotoksiline. Tulemused näitasid ka, et C. tubulosa tõhustas tõhusalt apoptootiliste valkude ekspressiooni ja inhibeeris MPP{11}}indutseeritud apoptoosi suurenemist.

PD ja GDNF

GDNF on neurotroofne tegur, mille eraldasid esmakordselt Lin et al. (1993). Lin et al. (1993) näitasid ka, et GDNF-il oli spetsiifiline toitumismõju dopamiinergilistele neuronitele rottide keskajus. GDNF, neurturiin (NTN), persefiin (PSP) ja artemiin (ART) moodustavad GDNF perekonna. Need on struktuurilt sarnased ja funktsionaalselt sarnased sekretoorsed valgud (Kotzbauer et al., 1996; Baloh et al., 1998; Milbrandt et al., 1998; Woodbury et al., 1998).

GDNF retseptor koosneb kahest komponendist. Esimene komponent, GFR, on kinnitatud glükosüülfosfatidüülinositooli (GPI) välismembraanile ja ankurdatud konneksiini pinnale. Teine komponent on Ret valk. Uuringud on näidanud, et GFR-i on nelja erinevat tüüpi: GFR 1, GFR 2, GFR 3 ja GFR 4. GFR 1 on GDNF kõrge afiinsusega retseptor (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl et al., 2001). Ret-valk on GDNF-i funktsionaalne retseptor. GDNF-i homodimeerne molekul seondub otseselt GFR 1-ga, moodustades komplekse ja interakteerub Ret-ga, mille tulemuseks on Ret dimerisatsioon ja aktiveerimine. Ret autofosforüülimise tõttu aktiveerib Ret mitu tavalist TH signaaliülekande rada. Ret valgu puudumisel põhjustab GDNF lisaks mRNA ekspressioonile ja C-fos funktsionaalsele aktiivsusele ka MAPK, PI-3 ja PLC- valgu fosforüülimist selle retseptorvalgu GFR 1 kaudu (He et al., 2008).

Uuringud on näidanud, et GDNF-il oli tugevaim kaitsev toime dopamiinergiliste neuronite suhtes (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). Sõidukites, mis kasutavad MPTP-d ja 6-hüdroksüdopamiini (6-OHDA) dopamiinergiliste neuronite kahjustuste tekitamiseks, kaitseb GDNF dopamiinergilisi neuroneid, vähendades apoptoosi ja soodustades aksonite kasvu, et kutsuda esile tüvirakkude diferentseerumist (Lucas et al., 2012; Littrell jt, 2013). Lin et al. (1993) näitasid, et GDNF soodustas spetsiifiliselt dopamiinergiliste neuronite elujõulisust, diferentseerumist ja aksonite kasvu, et soodustada DA omastamist neuronites. Uuring näitas ka, et GDNF mitte ainult ei hoidnud ära ägedat toksilisust, vaid leevendas ka MPP+ või 6-OHDA pikaajalist toksilisust dopamiinergilistes neuronites, vältides lisaks rakusurma stressis või kahjustatud rakkudes (Yu et al., 2010). Lisaks soodustas GDNF neuraalsete tüvirakkude proliferatsiooni ja diferentseerumist dopamiinergiliste neuronite suunas keskajus (Lindsay, 1995), et päästa dopamiinergilised neuronid retrograadsest degeneratsioonist (Hong-Juan et al., 2011).

Uuringud on näidanud, et GDNF-i ekspressioon SN-s vähenes loomvehiikulites oluliselt (Yang et al., 2010). See viitab sellele, et see võib olla üks patogeneesi mehhanisme PD rottidel. 5–15 µg/d GDNF süstimine MPTP-indutseeritud vehiikullooma lateraalsesse vatsakesse või juttkehasse kolmel järjestikusel kuul soodustas dopamiinergilise süsteemi nigrostriataalset paranemist kandjaloomal (Grondin et al., 2002). Uuringud PD GDNF-i ravi kohta loomvehiikulites on näidanud, et GDNF-i intratserebraalne süstimine erinevatesse ajupiirkondadesse, nagu SN, sabatuum ja lateraalne vatsake, parandas PD loommudelitega seotud liikumishäireid, sealhulgas motoorset aktiivsust, lihasjäikust ja treemor (Grondin et al., 2002). Kuid GDNF ei saa otseselt läbida hematoentsefaalbarjääri. Seetõttu kaasneb GDNF-i lokaalse tserebraalse süstimisega kliinilises rakenduses märkimisväärne risk ja raskused. Endiselt uuritakse rakendusi eksogeense GDNF-i juurutamiseks kontrollitud vabanemisega mikrosfääride, toimeainet prolongeeritult vabastavate kapslite ja viirusgeenide kaudu (Liang et al., 2010; Yang et al., 2010; Qiao jt, 2012). Arvestades erinevate tehnikate piiranguid eksogeense GDNF-i ajju sisestamiseks, on endogeense GDNF-i vabanemist soodustavad neuroprotektiivsed ained kliinilises rakenduses olulised.

PD jaC. tubulosaNanopulber

PD esineb sagedamini keskealistel täiskasvanutel ja eakatel. TCM-i teooria leiab, et PD paikneb peamiselt ajus ja on lisaks elujõulisele energia- ja verepuudulikkusele tingitud peamiselt maksa- ja neerupuudulikkusest. Selle teooria kohaselt peaks PD-ravi seega keskenduma neerude ja luuüdi turgutamisele.Yang et al. (2010)kasutas randomiseeritud, topeltpimedaid ja platseebokontrollitud kliinilisi uuringuid ning leidis, et kombineeritud ravi Madopar'i ja neerude toniseerivate retseptidega leevendas PD patsientide motoorseid düsfunktsioone. Ravi tulemus oli parem kui ühe ravi korral Madopariga. TCM-i monoteraapia või kombineeritud retseptiravi efektiivsus PD-s on kinnitatud PD loommudelites ja kliinilistes rakendustes. TCM-i rakendused neerude toniseerimiseks ja vereringe soodustamiseks vähendasid PD monoteraapia annust Madopariga. Mõned uuringud on näidanud, et TCM parandas PD sümptomeid ja kaitses dopamiinergilisi neuroneid, mis võisid olla tihedalt seotud endogeense GDNF ekspressiooni soodustamisega.Hong-Juan jt, 2011; Qiao jt, 2012).

Selles uuringus kasutatud neere toniseeriv ühend,C. tubulosananopulber, sisaldubCistanche, epimeediumjaRhizoma polygonati. Kaasaegsed uuringud näitavad, et keemiline koostisCistancheon ECH, mis kaitseb MPTP-indutseeritud PD hiirte dopamiinergilisi neuroneid SN-s ja inhibeerib DA ja DA transporteri vähenemist (Zhao jt, 2010). Lisaks takistab see 6-OHDA-indutseeritud DA vähenemist ja kaitseb striataalseid dopamiinergilisi neuroneid (Chen jt, 2007). Epimeedium inhibeerib kaspaasi -3 aktivatsiooni ja täidab neuroprotektiivset rolli (Liu jt, 2011). Epimeediumi flavonoidid soodustavad tõhusalt närvi tüvirakkude proliferatsiooni ja diferentseerumist (Yao jt, 2010).

Selles uuringusC. tubulosananopulber takistas MPP suurenemist+-indutseeritud apoptoos annusest sõltuval viisil. See parandas oluliselt TH ekspressiooniin vitrovehiiklit ja neil oli dopamiinergilistes neuronites oluline apoptootiline toime. MPTP-indutseeritud kandjahiirtel ilmnesid käitumishäired ja vähenes oluliselt TH ekspressioon keskaju kudedes ja DA tasemed, mis on PD tüüpilised patoloogilised tunnused. Erinevad annusedC. tubulosananopulber lühendas statsionaarset kestust, suurendas autonoomset tegevust, parandas käitumishäireid, suurendas DA taset ajus ja suurendas TH ekspressiooni sõidukites. Need tulemused viitasid selleleC. tubulosananopulber avaldas dopamiinergilistes neuronites kaitsvat toimet, parandades seeläbi sõidukite käitumishäireid. Erinevad annusedC. tubulosananopulber suurendas GDNF valgu ja selle retseptorvalkude ekspressiooni kandjahiirte ajus. Suur annusC. tubulosaravi reguleeris oluliselt Bcl2 ekspressiooni ja vähendas Baxi ekspressiooni, mis viitas selleleC. tubulosananopulbervõib soodustada GDNF ekspressiooni ja sekretsiooni MPTP-ga kahjustatud hiire ajus. Lisaks võib see avaldada neuroprotektiivset toimet dopamiinergilistes neuronites ja minimeerida neuronaalset apoptoosi GDNF-i neurotroofsete tugirollide kaudu.

See uuring näitas sedaC. tubulosananopulber avaldas mõlemas dopamiinergilistes neuronites kaitsvat toimetin vitrojain vivoja suurendas TH ekspressiooni, et parandada DA sisu. Samuti parandas see käitumishäireid MPTP-indutseeritud kandjahiirtel, reguleeris GDNF-i ja selle retseptorvalkude valgu ekspressiooni SN-is ning omas apoptootilist toimet PD-hiirtel. Kliiniliste mõjude aluseks olev mehhanismC. tubulosaNanopulber PD-s võib hõlmata endogeense GDNF-i sisalduse suurendamist ajus ja seeläbi dopamiinergiliste neuronite kahjustuste vähendamist.

LOODUSLIK TUBULOOS SUGUFUNKTSIOONI PARANDAMISEKS PHGS75% ECH 30% ACT 12