Cistanche Tubulosa kutsub esile inimese primaarsete ja metastaatiliste käärsoolevähi rakkude reaktiivsete hapnikuliikide vahendatud apoptoosi

Afnan Saleh Al-Menhali, Safia Ali Jameela, Aishah A. Latiff, Mohamed A. Elrayess, Mohammed Alsayrafi, Morana Jaganjac

Dopinguvastane labor Katar, toksikoloogia ja mitmeotstarbeline, Doha, Katar.

Antidopingu labor Qatar, bioteaduste uurimine, Doha, Katar.

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

ABSTRAKTNE

Käärsoolevähk on maailmas levinuim vähivorm kolmas. Tavapärased ravimeetodid on näidanud mõõdukat efektiivsust koos tõsiste kõrvalmõjudega, mistõttu on tungiv vajadus ohutumate alternatiivide järele. Selles uuringusCistanchetubulosa, kohalikku nimetust Thanoon, peeti potentsiaalseks fütoterapeutiliseks strateegiaks, kuna sellel on teadaolevalt suur terapeutiline potentsiaal traditsioonilises meditsiinis ja laialdane arvukus Lähis-Ida piirkonnas. Bioaktiivsed ühendid ekstraheeriti pulbristCistanchetubulosaja testiti nende vähivastaseid omadusi nelja käärsoole vastuvähkrakuliinid, sealhulgas kaks primaarsest kasvajast (CaCo2 ja HCT116) ja kaks metastaatilisest kohast (LoVo ja SW620). MõjuCistanchetubulosaSamuti uuriti apoptoosi ja raku redoks-homöostaasi esilekutsumist.Cistanchetubulosanäitas kõigi testitud vähirakuliinide kontsentratsioonist ja ajast sõltuvat proliferatsiooni pärssimist enam kui 60 protsenti pärast 72-tunnist töötlemist 1 mg/ml toorekstraktiga. Proliferatsiooni pärssimist iseloomustas apoptoosi indutseerimine, rakusisese reaktiivse hapniku liikide tootmine ja mitokondriaalsed superoksiidid. Need andmed viitavad sellele, et Cistanche tubulosa on paljulubav kandidaat käärsoolevähi vastases ravis. See on esimene uuring, mis näitab Cistanche tubulosa vähivastast bioaktiivsust käärsoolevähi rakkude vastu.

Toimeaine,Cistancheonvähivastanemõju

Lühendid:

7-AAD, 7-Amino-aktinomütsiin D;

CTE,Cistanchetubulosa ekstrakt;

EMEM, Eagle's Minimum Essential Medium;

FBS, veiseloote seerum; DCF, 2,7-diklorofluorestseiin;

DCFH-DA, 2,7-diklorodihüdrofluorestseiindiatsetaat;

DMEM, Dulbecco modifitseeritud Eagle'i sööde;

DMSO, dimetüülsulfoksiid; MTT, 3-[4,5-dimetüültiasool-2-üül]-2, 5-difenüültetrasoolium;

PE, fükoerütriin; RFU, suhtelised fluorestsentsühikud;

ROS, reaktiivsed hapniku liigid

SISSEJUHATUS

Kolorektaalne vähk on üks levinumaid vähkkasvajaid kogu maailmas (Brenner et al., 2014) ja selle esinemissagedus kasvab pidevalt, hinnanguliselt 2,4 miljonit juhtu 2035. aastal, tänu kaasaegsele toitumisele ja elustiilile ning vähenenud kehalisele aktiivsusele. Praegused jõupingutused ei ole praeguse kolorektaalvähi epideemiaga võitlemiseks piisavad ja seetõttu on tõhusaks ennetamiseks ja raviks vaja uudseid lähenemisviise, sealhulgas elustiili muutusi koos ohutumate alternatiivsete sekkumistega, nagu fütoteraapia (Weidner et al., 2015). Fütoteraapia, ravimtaimede kasutamine haiguste raviks, on olnud iidse inimkonna ajaloo vältimatu osa. Ravimtaimi on pikka aega kasutatud vähi alternatiivsete raviallikatena, mis moodustavad enam kui kuuekümne protsendi tavameditsiinis kasutatavatest vähivastastest ainetest (Balunas ja Kinghorn, 2005; Saibu et al., 2015). Mõned tuntumad näited hõlmavad Catharanthus roseus G. Doni ekstrakte. (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae) ja Camptotheca teravildavad Decne (Nyssaceae) (Cragg ja Newman, 2005; da Rocha et al., 2001). Näidati, et mitmed taimsed ekstraktid ja fütokemikaalid avaldavad kolorektaalse vähi korral kasvajavastast toimet, mis on tingitud reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) tootmise indutseerimisest ja sellega seotud vähirakkude apoptoosist, nagu Melissa officinalis'e ekstraktide puhul (Weidner et al., 2015).

Cistanchedeserticola omab pärssivat toimetkamberapoptoos

Fütoteraapia kandidaatide hulgasCistancheTubulosa, Orobanchaceae parasiitkõrbetaim (Jiang et al., 2009), mis on laialt levinud Aafrika, Aasia ja Vahemere piirkonna kuivades ja poolkuivades piirkondades, on näidanud, et sellel on väärtuslikud raviomadused.Cistanchetubulosa on laialdaselt kasutatud traditsioonilises meditsiinis ja sellel on väidetavalt raviv toime neerupuudulikkuse, haigusliku leukorröa, metrorraagia, naiste viljatuse ja seniilse kõhukinnisuse korral (Jiang et al., 2009). Lisaks traditsioonilisele meditsiinilisele kasutamisele on Cistanche Tubulosa't on viimase kümnendi jooksul intensiivselt uuritud, sealhulgas vasorelaksanti (Yoshikawa et al., 2006), hepatoprotektiivset (Morikawa et al., 2010), antihüperglükeemilist ja hüpolipideemilist toimet (Xiong et al., 2013). Cistanche Tubulosawas soovitatakse ka kui tugevat immuunsüsteemi tugevdajat, luu moodustumise soodustajat ning vananemis- ja väsimusevastast ainet (Xu et al., 2014). Lisaks on näidatud, et Cistanche tubulosa ekstrakt blokeerib amüloidi ladestumist Alzheimeri tõve mudelis (Wu et al., 2015). Vaatamata erinevatele terapeutilistele kasutustele ei ole Cistanche Tubulosa kui võimaliku vähivastase ainena mõju veel uuritud.

Käesolevas töös oleme uurinud vähivastast toimetCistancheTubulosa kahel primaarsel ja kahel metastaatilisel käärsoolevähi rakuliinil ning selle mõju aluseks olevad võimalikud mehhanismid.

MATERJALID JA MEETODID

Taimeekstrakti kogumine ja valmistamine

NäidisedCistanchetubulosa koguti 2014. aasta jooksul Katari kõrbealadelt ja taime ehtsust kinnitas herpetoloog. Vautšeri näidised on arhiveeritud ADLQ toksikoloogia ja mitmeotstarbelise osakonna osakonnas. Päikesekuivatatud taimeproovid jahvatati Retsch Knife Mill Grindomix GM300 abil peeneks pulbriks. Kakskümmend grammi pulbrit ekstraheeriti 200 ml ülipuhta veega üleöö temperatuuril 37 kraadi pöörleval loksutil 200 pm juures. TooresCistanchetubulosa ekstrakte (CTE) tsentrifuugiti 30 min kiirusel 8000 p/min, et sadestada lahustumatuid ühendeid, supernatant koguti ja külmkuivatati kasutades Labconco Freezone 6 pluss Freeze dryer. Kuivatatud ekstrakt taastati Dulbecco modifitseeritud Eagle'i söötmes (DMEM, SIGMA, Saksamaa) kontsentratsioonini 20 mg/ml ja filtriti steriilselt läbi 02- mikroni membraanfiltri.

Rakuliinid ja rakkude hooldus

Inimese käärsoole kartsinoomi rakuliinid CaCo2, SW620 ja LoVo saadi ettevõttest Cell Lines Service (CLS, Eppelheim, Saksamaa), samas kui HCT 116 rakuliin oli Katari ülikooli bioloogia- ja keskkonnateaduste osakonna lahke kingitus. CaCo2 ja HCT11 saadi käärsoole kartsinoomi esmasest kohast, SW620 ja LoVo aga metastaatilisest kohast. SW620, HCT116 ja LoVo rakke kultiveeriti ja hoiti DME söötmes, CaCo2 rakke aga Eagle'i minimaalses olulises söötmes (EMEM, SIGMA, Saksamaa). Rakke kasvatati ühekihilisena 37 kraadi juures vastavas söötmes, millele oli lisatud 10 protsenti veise loote seerumit (FBS, SIGMA, Saksamaa) ja 1 protsenti penitsilliini/streptomütsiini (SIGMA, Saksamaa), niisutatud atmosfääris, mis sisaldas 5 protsenti süsinikdioksiidi.

Rakkude elujõulisuse test

Tsütotoksilise aktiivsuse hindamiseks kasutati {{0}}[4,5-dimetüültiasool-2-üül]-2,5-difenüültetrasooliumi (MTT) testi. CTE sarnaselt varem kirjeldatule (Jaganjac et al., 2010). CaCo2, HCT116, SW620 ja LoVo rakkude külvitihedus, mida kasvatati 96-süvendi plaatidel, oli 104 rakku süvendi kohta. Rakud plaaditi 24 tundi enne töötlemist vastavasse söötmesse, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i. 24 tunni pärast sööde eemaldati ja rakke töödeldi 0, 0,25, 0,5, 1 ja 2 mg/ml CTE-ga 24, 48 ja 72 tundi temperatuuril 37 kraadi niisutatud atmosfääris, mis sisaldas 5 protsenti CO2. Pärast CTE-ga töötlemist sööde eemaldati ja igasse süvendisse lisati 40 µl MTT lahust (0,5 mg/ml).

Pärast 3-tunnist inkubeerimist eemaldati MTT lahus, formazaan lahustati dimetüülsulfoksiidis (DMSO, SIGMA, Saksamaa) ja neeldumist mõõdeti 590 nm juures mikroplaadilugejaga (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, Šveits).

Apoptoosi test

Apoptoos CaCo2, HCT116, SW620 ja LoVo rakkudes tuvastati, kasutades PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I koos 7-Amino-Actinomycin D-ga (7-AAD) elutähtsa värvainena (Becton). Dickinson International, Belgia) vastavalt tootja juhistele. Lühidalt öeldes külvati rakud 24-süvendiplaatidele tihedusega 5 × 104 rakku süvendi kohta vastavas söötmes, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i, 24 tundi enne CTE lisamist (0, 0,5, või 1 mg/ml). Pärast 24 CTE inkubeerimist rakud koguti, pesti kaks korda külma fosfaatpuhverdatud soolalahusega ja värviti fükoerütriini (PE) anneksiin V ja 7-AAD-ga 15 minutit toatemperatuuril pimedas. Värvitud rakke analüüsiti 1 tunni jooksul voolutsütomeetria abil, kasutades FACS-i. Aria III voolutsütomeeter ja FACSDiva tarkvara (Becton Dickinson) madala voolukiirusega, minimaalselt 104 rakku. Testi positiivse kontrollina kasutati rakkude töötlemist 4 tundi 6 uM kamptotetsiiniga (SIGMA).

Intratsellulaarne ROS tootmine

Intratsellulaarset ROS-i tootmist uuriti 2,7-diklorodihüdrofluorestseiindiatsetaati (DCFH-DA, SIGMA, Saksamaa) abil. DCFH-DA on mittefluorestseeruv sond, mis oksüdeeritakse intratsellulaarse ROS-iga fluorestseeruvaks ühendiks 2,7-diklorofluorestseiiniks (DCF) (Poljak-Blazi et al., 2011). DCFH DA test viidi läbi sarnaselt, nagu oleme varem kirjeldanud (Cindric et al, 2013; Poljak-Blazi et al., 2011). Lühidalt, 96-süvendi mustadel plaatidel kultiveeritud CaCo2, HCT116, SW620 ja LoVo rakkude külvitihedus oli 104 rakku süvendi kohta. Rakud plaaditi 24 tunniks vastavasse söötmesse, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i. Enne töötlemist inkubeeriti rakke 10 uM DCFH-DA-ga 37 kraadi juures 30 minutit 5% CO2/95% õhus. Seejärel rakke pesti ja töödeldi 0, 0,5 ja 1 mg/ml CTE-ga söötmes ilma fenoolpunaseta. Intratsellulaarset ROS-i moodustumist jälgiti pidevalt 25 tunni jooksul temperatuuril 37 kraadi ja 5 protsenti CO2, kasutades mikroplaadilugejat koos ülemise fluorestsentsi ja gaasi juhtimismooduliga (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, Šveits). Fluorestsentsi intensiivsust mõõdeti ergastuslainepikkusel 500 nm ja emissiooni tuvastamisel lainepikkusel 529 nm. Suvalised ühikud, suhtelised fluorestsentsi ühikud (RFU), põhinesid otseselt fluorestsentsi intensiivsusel.

Mitokondriaalse superoksiidi teke

CTE võimet indutseerida superoksiidi teket mitokondrite poolt hinnati raku läbilaskva mitokondritele suunatud MitoSOX Red sondi (Life Technologies) ja Hoechst 33342 abil tuumavärvimiseks (Life Technologies). CaCo2, HCT116, SW620 ja LoVo rakud külvati 96-süvendiplaatidele tihedusega 104 rakku süvendi kohta vastavas söötmes, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i, 24 tunniks. Seejärel laaditi rakud 20 minutiks 4 uM MitoSOX-i ja 2 uM Hoechst 33342-ga, pesti üleliigne värvaine ja süvendeid töödeldi 0, 0,5 ja 1 mg/ml CTE-ga 24 tundi temperatuuril 37 kraadi ja 5 protsenti CO2-ga. Fluorestsentsi intensiivsust mõõdeti ergastuse lainepikkusega 510 nm ja emissiooni tuvastamisega 580 nm MitoSOX ja ergastuse lainepikkusega 350 nm ja emissiooni tuvastamisega 461 nm Hoechst 33342 abil (Trading, Profinite fluorescence00 lugejaga PROfinite Tecan000 AG, Šveits).

Statistiline analüüs

Kirjeldav statistika näidati keskmisena pluss /− SD. Rühmadevaheliste erinevuste olulisust hinnati Studenti t-testi ja hii-ruuttesti abil. Kui võrreldi rohkem kui kahte rühma, kasutasime ühepoolset ANOVA-d koos sobiva post hoc testimisega. Kasutati Mircosoft Windowsi SPSS 11.{5}}1. Erinevusi P-ga alla 0,05 peeti statistiliselt olulisteks.

Cistancheonvähivastaneomadused ja parandabpuutumatus

TULEMUSED

CTE mõju inimese käärsoolevähi rakuliinide proliferatsioonile on näidatud joonisel 1. Kõik testitud CTE kontsentratsioonid näitasid tugevat inhibeerivat toimet CaCo2 rakuliinile kontsentratsioonist ja ajast sõltuval viisil (joonis 1A). Seitsekümmend kaks tundi kestnud CTE-ravi pärssis CaCo2 rakkude kasvu rohkem kui 60 protsenti võrreldes kontrolliga (p < 0.05="" kõigi="" kontsentratsioonide="" puhul).="" cte-ravi="" märkimisväärne="" mõju="" hct116="" rakkude="" kasvule="" tuvastati="" ka="" kõigi="" aegade="" kahe="" kõrgeima="" kontsentratsiooni="" juures="" (1="" mg/ml="" ja="" 2="" mg/ml),="" saavutades="" viimase="" puhul="" enam="" kui="" 70="" protsendi="" vähenemise.="" kontsentratsioon="" (joonis="" 1b,="" p="">< 0,05).="" kuigi="" kaks="" madalamat="" cte="" kontsentratsiooni="" (0,25="" ja="" 0,5="" mg/ml)="" vähendasid="" oluliselt="" hct116="" rakkude="" kasvu="" 24="" tunni="" pärast=""><0.05), they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" 72="" hours="" treatment="" compared="" to="" control="" (p="">{{0}}.{10}}5). Ajast ja kontsentratsioonist sõltuv proliferatsiooni pärssimine CTE-ga kinnitati LoVo rakkudes rohkem kui 60 protsenti kõrgeima kontsentratsiooni juures (p < 0.05)="" (joonis="" 1c)="" ja="" kõik="" neli="" testitud="" cte="" kontsentratsiooni="" vähendasid="" sw620="" rakkude="" kasvu="" 48="" tunni="" pärast="" (joonis="" 1d,="" p="">< 0,05="" kõigi="" jaoks).="" pärast="" 72-tunnist="" ravi="" täheldati="" sama="" efekti="" ainult="" kahe="" kõrgeima="" kontsentratsiooni="" puhul="" (p="">< 0,05),="" samas="" kui="" kontsentratsioonid="" 0,25="" ja="" 0,5="" mg/ml="" ei="" näidanud="" kontrolliga="" võrreldes="" olulist="" toimet="" (p=""> 0,05). 0,5 ja 1 mg/ml CTE-ravi mõju apoptoosi esilekutsumisele testiti täiendavalt kõigis neljas rakuliinis (joonis 2). Varajase apoptoosi rakkude arvu suurenemine tuvastati HCT116 ja LoVo puhul pärast 24-tunnist töötlemist 0,5 mg/ml (p<0.05, figure="" 2b="" and="" 2c)="" and="" in="" all="" cell="" lines="" at="" 1="" mg/ml=""><0.05). a="" significant="" increase="" in="" necrotic="" or="" late="" apoptotic="" cell="" number="" was="" further="" observed="" in="" caco2="" and="" sw620="" cell="" lines=""><0.05, figure="" 2a="" and="" 2d).="" the="" ability="" of="" cte="" to="" induce="" intracellular="" ros="" production="" is="" demonstrated="" in="" figure="" 3.="" three="" hours="" following="" cte="" treatment="" there="" was="" a="" strong="" increase="" in="" intracellular="" ros="" production="" in="" all="" cell="" lines=""><0.05). the="" intracellular="" ros="" production="" increased="" progressively="" throughout="" the="" 25="" hours="" of="" treatment="" in="" a="" time="" and="" concentration-dependent="" manner.="" furthermore,="" staining="" of="" cells="" with="" mitochondria-targeted="" probe="" revealed="" a="" strong="" impact="" of="" cte="" on="" mitochondrial="" superoxide="" production="" in="" a="" concentration-dependent="" manner="" (figure="" 4).="" the="" highest="" increase="" in="" superoxide="" production="" by="" mitochondria="" was="" observed="" in="" hct116="" (69%,="" figure="" 4b)="" and="" lovo="" cells="" (82%,="" figure="" 4c)="" following="" 24="" hours="" of="" treatment="" with="" 1="" mg/ml="" of="">

ARUTELU

Kuigi varasemad uuringud on teatanud paljudest raviomadustestCistanchetubulosa, see on esimene aruanne selle proliferatsioonivastase toime kohta pahaloomulistes rakkudes. Cistanchetubulosa bioaktiivsed ühendid, mida ekstraheeriti veega, väga polaarse lahustiga, näitasid tugevat vähivastast bioaktiivsust. Oleme varem võrrelnud tõhusustCistanchetubulosa lahustati vees teiste lahustite, näiteks metanooli ja etüülatsetaadi vastu, kuid veeekstraktidel oli kõige lootustandvam vähivastane toime (andmeid pole näidatud).

Oleme näidanud CTE võimet kontsentratsioonides 1 mg/ml ja 2 mg/ml pärssida 60 protsenti nii primaarsete kui metastaatilise käärsoolevähi rakuliinide kasvust, mis näitab Cistanche tubulosa potentsiaalselt olulist rolli käärsoolevähi ravis. Võrreldes normaalsete rakkudega iseloomustab vähirakke üldiselt redoks-homöostaasi häire ja praeguste vähivastaste ravimeetodite ühine strateegia on suurendada raku oksüdatiivset stressi (Yang et al, 2013). Kuigi ROS-i füsioloogiliselt madalal tasemel on signaalmolekulidena oluline roll, võib liigne ROS-i tootmine kaasa aidata vähi ebastabiilsusele ja pahaloomulisusele (Liou ja Storz, 2010). Paradoksaalselt muudab see raku redoks-homöostaasi tasakaalustamatus vähirakud haavatavamaks ROS-indutseeritud rakusurma suhtes (Jaganjac et al., 2008; Nogueira ja Hay, 2013). Selles uuringus kirjeldatud CTE proliferatsioonivastast toimet võivad vahendada ekstraktis sisalduvate teadaolevate ja tundmatute ühendite erinevad rakuvälised ja intratsellulaarsed mehhanismid, mis on suunatud mitmetele radadele, millel on apoptoosis oluline roll. Erinevate rakusurma viiside eristamiseks uurisime võimalikku mehhanismi, mis vastutab täheldatud CTE-indutseeritud tsütotoksilisuse eest.

Meie andmed näitavad, et CTE suurendab rakusisest ROS-i tootmist ja sellest tulenevalt ROS-indutseeritud rakusurma. Raku redoksseisund mängib samuti otsustavat rolli apoptoosi reguleerimisel ja mitokondriaalne elektronide transpordiahel on raku ROS-i tekke üks peamisi kohti (Trachootham et al., 2008). Lisaks võib rakusisene ROS põhjustada raku apoptoosi nii mitokondritest sõltuvate kui ka sõltumatute radade kaudu (Sinha et al., 2013). Tõepoolest, meie andmed näitavad ka seda, et CTE indutseeritud fosfatidüülseriini eksternaliseerimine, mis on nii primaarsete kui ka metastaatiliste vähirakuliinide tavaline toime apoptoosile, viitab sellele, et CTE-indutseeritud surma mehhanismi vahendab pigem apoptoos kui nekroos. Apoptoosi aktiveerimine vähirakkudes on korrigeeriv strateegia ja paljud vähivastased ravimid võivad avaldada vähirakkudes apoptootilist toimet.

Seetõttu on vähirakkudes apoptootilise toimega ühendid või ekstraktid potentsiaalselt kasulikud vähivastaste ravimite uuringutes (Wong, 2011). Et teha kindlaks, kas CTE indutseeritud pro-apoptootilist toimet vahendab mitokondrite poolt indutseeritud ROS-mehhanism, mõõtsime CTE-ga töödeldud rakkudes mitokondritele suunatud fluorestsentssondi abil superoksiidi tootmist. Meie andmed näitavad selgelt, et CTE stimuleerib mitokondriaalse superoksiidi tootmist, mis viitab sellele, et Cistanche tubulosa vähivastane aktiivsus on vähemalt osaliselt vahendatud mitokondrite poolt indutseeritud ROS-mehhanismi kaudu.

Cistancheonvähivastanejamakskaitsemõjusid

JÄRELDUSED

Kokkuvõtteks võib öelda, et meie andmed viitavad sellele, et kõrbetaime Cistanche tubulosa veeekstrakt võib olla paljutõotav kandidaat vähivastaseks lähenemisviisiks koos teiste tavapäraste käärsoolevähi ennetamise ja ravi ravimeetoditega. Samuti demonstreerime, et taimeekstrakti toksilisust vähirakkude vastu vahendab suurenenud rakusisene ROS-i tootmine ja vähemalt osaliselt mitokondriaalsest sõltuvast apoptoosist. Täiendavad uuringud käivad vähivastase toime eest vastutavate üksikute bioloogiliselt aktiivsete koostisosade eraldamiseks ja iseloomustamiseks.

Vaja on rohkem uuringuid, et hinnata selle ekstrakti potentsiaalset kasutamist tõhusa kemopreventiivse ainena ja mõista käärsoolevähi rakkude toimemehhanisme molekulaarsel tasemel. Samuti on vaja täiendavaid prekliinilisi ja kliinilisi uuringuid, et kinnitada Cistanche tubulosa täheldatud kasulikke tervisemõjusid vähi ennetamisel.

TUNNUSTUS

Rahaline toetus ja sponsorlus

Seda uuringut toetas Katari antidopingu labor.

Huvide konflikt:

Autorid ei kinnita huvide konflikti.

VIITED

Balunas MJ, Kinghorn, AD. Ravimite avastamine ravimtaimedest. Life Sci. 2005;78:431-41.

Brenner H, Kloor M, Pox CP. Pärasoolevähk. Lancet 2014;383, 1490-502.

Cindric M, Cipak A, Zapletal E, Jaganjac M, Milkovic L, Waeg G, Stolc S, Zarkovic N, Suzana Borovic S. Stobadiin nõrgendab 4-hüdroksünonenaali põhjustatud soolebarjääri mudeli kahjustust. Toksikool In vitro. 2013;27:426-32.

Cragg GM, Newmani DJ. Taimed vähivastaste ainete allikana.J Ethnopharmacol. 2005;100:72-9.da

Rocha AB, Lopes RM, Schwartsmann G. Looduslikud tooted vähivastases ravis. CurrOpinPharmacol. 2001;1:364-9.

Jaganjac M, Matijevic T, Cindric M, Cipak A, Mrakovcic L, Gubisch W, Zarkovic N. CMV{0}} promootori induktsioon 4-hüdroksü-2-nominaal inimese embrüonaalsetes neerurakkudes. Acta Biochim Pol. 2010;57:179-83.

Jaganjac M, Poljak-Blazi M, Zarkovic K, Schaur RJ, Zarkovic N. Granulotsüütide osalus Walker 256 kartsinoomi spontaanses regressioonis. Cancer Lett. 2008;260:180-6.

Jiang Y, Tu PF. Cistanche liikide keemiliste koostisosade analüüs. J Chromatogr A. 2009;1216:1970-9.Liou GY, Storz P. Reaktiivsed hapniku liigid vähis. Vaba Radic Res. 2010;44:479-96.

Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Hepatoprotektiivse toimega atsüülitud fenüületanoidoligoglükosiidid kõrbetaimest Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2010;18:1882-90.

Nogueira V, Hay N. Molekulaarsed rajad: reaktiivsete hapnikuliikide homöostaas vähirakkudes ja mõju vähiravile. Clin Cancer Res. 2013;19:4309-14.

Poljak-Blazi M, Jaganjac M, Sabol I, Mihaljevic B, Matovina M, Grace M. Raua ioonide mõju reaktiivsete hapnikuliikide moodustumisele, emakakaelavähi rakuliinide kasvule ja E6/E7 onkogeeni ekspressioonile. Toksikool In vitro. 2011;25:160-6.

Saibu GM, Katerere DR, Rees DJG, Meyer M. Tulbaghia violacea lehtede ja sibulate veeekstraktide in vitro tsütotoksiline ja pro-apoptootiline toime. J Etnopharmacol. 2015;164:203-9.

Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Oksüdatiivne stress: mitokondritest sõltuvad ja mitokondritest sõltumatud apoptoosi teed. Arch Toxicol.2013; 87:1157-80.

Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, Nilsa RD, Huang P. Rakkude ellujäämise redoksregulatsioon. Antioksiidi redokssignaal. 2008;10:1343-74.

Weidner C, Rousseau M, Plauth A, Wowro SJ, Fischer C, Abdel-Aziz H, Sauer S. Melissa officinalis'e ekstrakt kutsub esile apoptoosi ja pärsib proliferatsiooni käärsoolevähi rakkudes reaktiivsete hapnikuliikide moodustumise kaudu. Fütomeditsiin. 2015;22:262-70.

Wong RS. Apoptoos vähi korral: patogeneesist ravini. J Exp Clin Cancer Res. 2011;30:87.

Wu SH, Chou FP, Chyau CC, Chen JH, Tu SF, Lin HH. Wasabia japonica ekstrakti vähivastane toime Hep3B maksavähirakkudes ROS-i akumulatsiooni, DNA kahjustuse ja p73-vahendatud apoptoosi kaudu. J Function Foods. 2015;14:445-55.

Xiong WT, Gu L, Wang C, Sun HX, Liu X. Cistanche tubulosa antihüperglükeemilised ja hüpolipideemilised toimed 2. tüüpi diabeediga DB/DB hiirtel. J Etnopharmacol. 2013;150:935-45

Xu R, Sun S, Zhu W, Xu C, Liu Y, Shen L, Shi Y, Chen J. Erinevate Cistanche liikide etanooli ekstraktide mitmeastmelised infrapuna-makro-sõrmejälje omadused kombineerituna HPLC sõrmejäljega. J Moli struktuur. 2014;1069:236-244.

Yang Y, Karakhanova S, Werner J, Bazhin AV. Reaktiivsed hapnikuliigid vähibioloogias ja vähivastases ravis. Curr Med Chem. 2013;20:3677-92.

Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Cistanche tubulosa vasorelakseeriva toimega fenüületanoidoligoglükosiidid ja atsüülitud oligosugarid. Bioorg Med Chem. 2006;14:7468-75.