Abstraktne

Eesmärk:Et uurida molekulaarset mehhanismi, mille abilCistanche põhinev Bushen Kaixuan Tongluo valemavaldab diabeetilise neeruhaigusega (DKD) hiirtel neerude kaitsvat toimet, reguleerides tsüklilise adenosiinmonofosfaadi (cAMP) signaaliülekande rada.

Meetodid:Kolmkümmend spetsiifilist patogeenivaba (SPF) isast db/db hiirt toideti adaptiivselt 3 nädala jooksul. Hiiri juhusliku sabaveeni vere glükoosisisaldusega 11,1 mmol·L-1 või suurem ja uriini mikroalbumiini/kreatiniini suhe 30 mg·g-1 loeti edukaks. Modelleeritud hiired jaotati juhuslikult viide rühma (n=6 rühma kohta): mudelrühm, madala, keskmise ja suure annuse Bushen Kaixuan Tongluo Formula rühmad (7, 14 ja 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) ja irbesartaani rühm (20 mg¹kg⁻¹). Tühirühmana kasutati kuut db/m hiirt.

Ravi kestis 12 nädalat maosisese manustamise teel. Jälgiti üldisi seisundeid, kehakaalu ja neerufunktsiooni näitajaid. Pärast sekkumist mõõdeti tühja kõhuga veresuhkru taset (FBG). Automaatset biokeemilist analüsaatorit kasutati seerumi kreatiniini (SCr), vere uurea lämmastiku (BUN), uriini mikroalbumiini (uALB), albumiini-kreatiniini suhte (ACR), aspartaataminotransferaasi (AST), alaniinaminotransferaasi (ALT), üldkolesterooli (TC), triglütseriidide (TG), insuliinglütsüüli (LEP) valgu (INGlütsüül) ja insuliinglütseriidi (LEP) hindamiseks automaatse biokeemilise analüsaatoriga.

Neerukoe histopatoloogiat hinnati HE, PAS ja Massoni trikroomvärvimise abil. Immunohistokeemia (IHC) tuvastas proteiinkinaasi A (PKA) ja cAMP vastuseelementi siduva valgu (CREB) ekspressioonid. Western blot analüüsis PKA, fosforüülitud PKA (p-PKA), CREB, fosforüülitud CREB (p-CREB) ja Bcl-2 tasemeid. PKA, CREB ja Bcl-2 mRNA ekspressioonide hindamiseks kasutati reaalajas PCR-i.

Tulemused:Võrreldes tühja rühmaga, ilmnes mudelrühmal letargia, vähenenud aktiivsus ja oluliselt suurenenud kehakaal (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Võrreldes mudelrühmaga näitasid valemiga töödeldud rühmad üldseisundi paranemist ja kehakaalu langustrendi. BUN, uALB, ACR, TC, GSP ja INS vähenesid oluliselt (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Histopatoloogiline analüüs näitas, et mudelirühmal olid klassikalised DKD tunnused, nagu glomerulaarse basaalmembraani paksenemine, mesangiaalse maatriksi laienemine ja kollageeni ladestumine tubulointerstitiumis. Need patoloogilised muutused leevenesid kõigis ravirühmades.

IHC tulemused näitasid mudelirühmas oluliselt vähenenud p-PKA ja p-CREB ekspressioone (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Western blot näitas, et p-PKA/PKA, p-CREB/CREB ja Bcl-2 tase oli mudelrühmas oluliselt vähenenud (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

Reaalajas PCR kinnitas mudelirühmas PKA, CREB ja Bcl-2 mRNA allareguleerimist (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Järeldused:TheCistanche põhinev Bushen Kaixuan Tongluo valemparandab maksa- ja neerufunktsiooni, korrigeerib lipiidide ja glükoosi metabolismi häireid db/db hiirtel. Selle neerude kaitsev toime on seotud selle ülesreguleerimisegacAMP/PKA/CREB signaalirada, mis vähendab neerufibroosi ja oksüdatiivset stressi, kaitstes seeläbi neerufunktsiooni.

 

 

 

 

Cistanche-põhine Bushen Kaixuan Tongluo valemmaksa- ja neerufunktsiooni parandamine

Lisateabe saamiseks klõpsake pildil

Märksõnad

Diabeetiline neeruhaigus (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo valem;
Cistanche;
cAMP signaalirada;
Traditsiooniline hiina meditsiin (TCM)

 

Cistanche-põhine ravim

 

Taust

Diabeetiline neeruhaigus (DKD), mis on diabeedi üks raskemaid mikrovaskulaarseid tüsistusi, on lõppstaadiumis neeruhaiguse (ESRD) peamine põhjus kogu maailmas. Selle kasvav levimus seab rahvatervisesüsteemidele olulise väljakutse. DKD tunnuste hulka kuuluvad progresseeruv glomerulaarse mesangiaalse maatriksi laienemine, tubulointerstitsiaalne fibroos ja püsiv proteinuuria. Patogenees hõlmab keerulisi koostoimeid glükoosi ja lipiidide metabolismi häirete, oksüdatiivse stressi ja erinevate signaaliradade ebanormaalse aktiveerimise vahel.

Praegused esmavaliku ravimid hõlmavad peamiselt reniin-angiotensiini süsteemi (RAS) inhibiitoreid, mis aitavad vähendada glomerulaarhüpertensiooni ja aeglustada varajast proteinuuriat. Siiski on need vähem tõhusad patsientidel, kellel on väljakujunenud tubulointerstitsiaalne fibroos, 30–40% juhtudest progresseerub ESRD-ks.

Seetõttu on uute DKD mehhanismide uurimine ja tõhusate, ohutute terapeutiliste sihtmärkide leidmine kiireloomuline kliiniline ja teaduslik huvi. Traditsiooniline meditsiin pakub mitme eesmärgiga regulatsiooni, millel on vähem kõrvaltoimeid, mistõttu on see sobivam pikaajaliseks kasutamiseks kroonilise neeruhaiguse korral. TheCistanche põhinev Bushen Kaixuan Tongluo valemon empiiriliselt kinnitatud DKD ravimtaimede segu, mida on varasemates kliinilistes uuringutes näidatud sümptomite parandamiseks ja haiguse progresseerumise edasilükkamiseks.

Selle molekulaarne mehhanism, eriti selle koostoime peamiste signaaliradadega, on aga endiselt halvasti mõistetav. Tõendid viitavad sellele,cAMP/PKA/CREBrada võib leevendada neerufibroosi, kuid sellega seotud uuringud on piiratud. See uuring keskendub sellele teele, et selgitada, kuidas seeCistanche-põhine valemparandab DKD-d.

 

Materjalid ja meetodid

1. Loomad

30 isast db/db hiirt (7 nädala vanused, SPF-klass, kehakaal: 37,58±0,62 g)

6 vanusega sobivat db/m hiirt (kehakaal: 24,38±0,35 g)

Müüja: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Litsents: SCXK (Su) 2020-0009 ja SYXK (Jing) 2020-0033

Eetika kinnitus: BUCM2024041506-2090

2. Taimne koostis

Bushen Kaixuan Tongluo valem sisaldab (grammides):
Cistanche(asendab toores Astragalus) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officina Eurvi20, Rosafer 2 (praetud) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Kõik maitsetaimed kinnitas litsentseeritud apteeker ja valmistati vee keetmisega, redutseeriti vaakumis ja pihustuskuivatati pulbriks. Lõplik kontsentratsioon oli 1,43 g·mL⁻¹ toortaimi.

3. Reaktiivid ja instrumendid

(Üksikasjalikud loendid leiate originaaltekstist.)

 

Eksperimentaalne disain

Mudeli hindamine

Pärast 3-nädalast adaptiivset söötmist peeti edukateks DKD mudeliteks hiiri, kelle vere glükoosisisaldus oli suurem või võrdne 11,1 mmol·L⁻¹ ja ACR suurem või võrdne 30 mg·g⁻¹.

Rühmitamine ja doseerimine

Tühi rühm (db/m): vesi

Mudelirühm: vesi

Väike annus: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Keskmine annus: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Suur annus: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Irbesartaani rühm: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Kestus: 12 nädalat tasuta söötmise ja joomise all.

---

Proovide kogumine ja analüüs

Uriin:Koguti 24 tunni jooksul, tsentrifuugiti ja säilitati –20 kraadi juures

Veri:Kogutakse orbitaalse ekstraheerimise teel, tsentrifuugitakse ja säilitatakse –80 kraadi juures

Neerud:Jaotatud patoloogia (formaliiniga fikseeritud), valgu (vedel lämmastik) ja geeniekspressiooni (külmutatud) jaoks

---

Tuvastamismeetodid

Biokeemiline analüüs:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP ja uALB

Histopatoloogia:HE, PAS, Massoni värvimine

IHC:p-PKA ja p-CREB valgu ekspressioon

Western Blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -aktiin

Reaalajas PCR:PKA, CREB ja Bcl-2 mRNA ekspressioon

---

Tabel 1. Praimeri järjestused

Gene	Forward Primer (5′–3′)	Reverse Primer (5′–3′)	Pikkus (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95