Botaanilise nahahoolduse koostisosa valimine peaks hõlmama enamat kui ahvatleva taimeloo leidmist. Nahahooldusbrändi, lepingulise tootja või koostisosade turustaja jaoks on kasulikumad küsimused järgmised:

Milliseid ühendeid ekstrakt sisaldab?

Kui järjepidevalt saab tootja nende kontsentratsioone kontrollida?

Millised katsed toetavad kavandatud rakendust?

Kas tõendid kehtivad tegeliku ostetava koostisosa kohta?

Milliseid täiendavaid katseid on vaja enne valmistoote turule toomist?

Käesolevas artiklis käsitletav tehniline dokument keskendub selleleverbaskosiid, mis on tuletatud Cistanche'istja selle kavandatavad rakendused naha lipiidide tootmisel, hüdratatsioonil ja barjääriga seotud uuringutes.

Selles kirjeldatakse nii puhastusprotsessi kui ka laborikatseid, milles võrreldakse puhastatud verbaskosiidi mitme Cistanche ekstrakti ja muude koostisosadega.

 

 

16% verbascoside cistanche ekstrakt

Keskne kaubanduslik õppetund on otsekohene: üldist Cistanche ekstrakti ja kõrgelt puhastatud Cistanche päritolu ühendit ei tohiks käsitleda vahetatavate koostisosadena.

Tõendusmärkus:Allpool olevad uurimistulemused on esitatud tõlkimiseks esitatud Hiina patenditekstis. Tarnitud materjal ei sisalda originaaljooni, täielikke arvandmekogumeid, patendi avaldamise üksikasju ega inimeste kliinilisi uuringuid. Seetõttu tuleks seda lugeda tehniliseks avalikustamiseks, mitte valmistoote tõhususe või regulatiivse heakskiidu sõltumatuks kinnituseks.

 

1. Mis on Verbascoside?

Verbaskosiidi tuntakse ka kuiakteosiid. Need on pigem sama keemilise aine kui kahe erineva toimeaine nimetused. FDA aineregistris on mõlemad nimetused sama aine identiteedi all. (precision.fda.gov)

 

 

Kaasasolevas kirjelduses kirjeldatakse verbaskosiidi kui fenüületanoidglükosiidi, mis on saadud Cistanche liikide kuivatatud lihavatest vartest. Peamised nimetatud botaanilised allikad on:

Cistanche deserticola

Cistanche tubulosa

Cistanche sinensis

Cistanche salsa

Dokumendis uuritakse verbaskosiidi kui potentsiaalset botaanilist toimeainet paiksete ravimvormide jaoks, pöörates erilist tähelepanu lipiidide metabolismile, hüaluroonhappe tootmisele, tiheda ühendusega valkudele ja rakkude migratsioonile.

Miks on nimi koostisosade ostmisel oluline?

Tarnija pakkumiste võrdlemisel küsige kinnitust:

Botaanilised liigid ja taimeosa.

Kas materjal on terve ekstrakt, standardekstrakt või puhastatud ühend.

Mõõdetud verbaskosiidi sisaldus.

Kasutatud analüüsimeetod ja etalon.

Kas märgitud protsent tähistab massi- või kromatograafilise ala protsenti.

Ainuüksi "Cistanche ekstrakti" tsitaat ei anna piisavalt teavet, et teha kindlaks, kas see vastab konkreetses katses hinnatud materjalile.

2. Miks keskendub avalikustamine nahabarjäärile?

Dokumendis esitatakse pigem mitme otspunktiga uurimiskontseptsioon kui lihtne pinnaniisutamise väide.

Selle pakutud järjestus on järgmine:

Epidermaalsete rakkude uuenemine → tugevamad rakkudevahelised ühendused → lipiidide tugi → hüaluroonhappe tootmine → paranemisega seotud tegevus

Selle kontseptsiooni uurimiseks kasutasid teadlased HaCaT rakke. HaCaT on inimese immortaliseeritud keratinotsüütide rakuliin, mis on loodud laborimudelina epidermise bioloogia ja keratiniseerumise uurimiseks. See ei ole rakutüüp, mida inimese nahas loomulikult nimetatakse "HaCaT". (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

Koostisosade ostjate jaoks on see eristamine oluline:kultiveeritud rakkude tulemused on uurimistöö lähtepunktiks, mitte asendamaks valmistoote katsetamist inimese nahal.

Peamised teatatud lõpp-punktid

Uurimisala	Kaasasolevas dokumendis kirjeldatud mõõtmised	Praktiline tõlgendus
Raku vastus	CCK-8 test	sõelumise lõpp-punkt; täiendavad meetodid tugevdaksid massihävitusrelvade leviku väidet
Lipiididega seotud tegevus	Rasvhapete süntaasi aktiivsus; ACC , FASN ja N-SMase avaldis	Toetab lipiidide metabolismi edasist uurimist, kuid ei määra otseselt kogu naha barjääri lipiidide profiili
Hüaluroonhape	HA sisaldus; HAS2, HAS3 ja CD44 ekspressioon	Toetab HA-ga seotud radade edasist uurimist
Rakkudevahelised ühendused	Claudin-1 ja okludiini tase	Mõõdab valitud tiheda ühendusega valke, mitte täielikku barjäärifunktsiooni
Remondiga seotud tegevus	Raku kriimustuste test	In vitro lünkade sulgemise lõpp-punkt, mitte kliiniline haavade paranemise uuring
Niiskuse säilitamine	Preparaadi massi säilitamine klaasplaatidel	Preparaadi tasemel laboritest, mitte naha hüdratatsiooniuuring

Need tõlgendused tulenevad kaasasolevas tekstis kirjeldatud katsemeetoditest.

 

3. Mis teeb selle uuringu kasulikuks nahahooldusettevõtetele?

Avalikustamises võrreldakse mitmeid materjale, selle asemel, et eeldada, et iga Cistanche päritolu koostisosa annab sama vastuse.

Testitud materjalide hulka kuuluvad:

Cistanche polüsahhariidi ekstrakt.

Mitmed fenüületanoid-glükosiidi sisaldavad ekstraktid.

Täielik fenüületanoidglükosiidi ekstrakt.

ehhinakosiid.

Puhastatud verbaskosiid.

Kaasasoleva dokumendi kohaselt näitas puhastatud verbaskosiid aktiivsust mitmes mõõdetud lõpp-punktis. Mõned segaekstraktid näitasid teatud testides aktiivsust, kuid mitte teistes.

Ostmine kaasavõetav

Ostke spetsifikatsioon, mis vastab teie arenduseesmärgile – mitte ainult taime nimele.

Näiteks:

Kui teie projekt põhineb puhastatud verbaskosiidi katsetel, taotlege andmeid puhastatud materjali kohta.

Kui teie koostis kasutab standardiseeritud tervikekstrakti, taotlege selle ekstrakti testimist.

Kui tarnija viitab mõne muu ekstraheerimisprotsessi uuringule, küsige, kas testitud koostis on võrreldav pakutava materjaliga.

Tõendeid ühe koostisosa klassi kohta ei tohiks automaatselt teisele üle kanda.

4. Kuidas verbaskosiidi avalikustatakse?

Kirjeldatud protsessil on neli peamist etappi:

Botaaniline ettevalmistus:Eeltöötle ja pulbrista kuivatatud Cistanche lihavad varred.

Ekstraheerimine:Kasutage 50–80% etanooli vesilahust.

Rikastamine:Eraldage fraktsioonid, kasutades AB-8 makropoorset adsorptsioonvaiku.

Puhastamine:Kasutage silikageeli kromatograafiat, millele järgneb kontsentreerimine ja külmkuivatamine.

Määratud lõplik puhtus onvähemalt 98%, kuigi tarnitud tekst ei sisalda analüütilist valideerimist ega partiiandmeid, mis on vajalikud selle spetsifikatsiooni sõltumatuks kinnitamiseks.

Kriitiline tootmisküsimus: jääklahustid

Avaldatud kromatograafiaetapp kasutabkloroform ja metanool.

Kaubandusliku hankimise projekti puhul küsige tootjalt tegeliku tootmise lahustite loendit, lahusti eemaldamise kontrolle ja partiipõhiseid jääklahusti tulemusi. ICH Q3C pakub farmaatsiaraamistikku jääklahusti riskide hindamiseks; seda ei tohiks kujutada universaalse kosmeetika vastuvõtmise standardina. (ema.europa.eu)

Ärge eeldage, et "taimne" tähendab "valmistatud ainult vee ja etanooliga".

 

5. Mida niiskuse säilitamise test tegelikult näitab?

Kaasasolevas dokumendis kirjeldatakse võrdlust:

Seerum, mis sisaldab2% verbaskosiidi.

Seerum, mis sisaldab2% ehhinakosiidi.

Positiivne kontrollseerum, mis sisaldab5% glütseriin.

Proovid asetati aadressile25 kraadi ja 50% suhtelist õhuniiskustja nende massi mõõdeti aja jooksul.

Avalikustatakse, et verbaskosiidi sisaldav proov säilitas nendes tingimustes rohkem massi.

See on potentsiaalselt kasulik koostise sõelumise vaatlus. Kuid kirjeldatud meetod ei tuvasta:

Suurepärane niisutus inimese nahal.

Madalam transepidermaalne veekadu.

Kliiniline paremus glütseriini ees.

Parem jõudlus igas koostises.

Et täheldatud erinevus tulenes ainult nimetatud aktiivsest, ilma täielikult avalikustatud sobitatud sõidukite võrdluseta.

Brändi jaoks, kes kavandab võrdlevat väidet, katsetage valmis koostisi sobivalt kavandatud uuringu abil.

 

6. Praktiline Cistanche'i koostisosade hankimise kontrollnimekiri

Kasutage Cistanche ekstrakti tarnija või puhastatud verbaskosiidi tootja hindamisel järgmisi küsimusi.

Ostu küsimus	Nõudmisel dokumentatsioon
Mis on botaaniline allikas?	Liigi identifitseerimine, taimeosade deklaratsioon ja jälgitavus
Mida täpselt tarnitakse?	Täielik koostis, sealhulgas kandjad, abiained ja abiained, kui see on asjakohane
Kui palju verbaskosiidi on?	Partiipõhine analüüsi ja analüüsimeetodi sertifikaat
Kuidas identiteeti kinnitatakse?	Kromatograafiline identifitseerimis- ja võrdlusstandarditeave
Milliseid lahusteid kasutatakse?	Tegelik tootmislahusti deklaratsioon ja lahusti jääkide testi tulemused
Kui järjepidev on tootmine?	Tüüpilised tulemused mitmest partiist
Kas materjal on ettenähtud kasutuseks sobiv?	Sihtotstarbeline dokumentatsioon ja asjakohane ohutustoimik
Kas see töötab valitud valemis?	Lahustuvuse, ühilduvuse, stabiilsuse ja pakendi arendamise andmed
Mis toetab esitatud väiteid?	Uuringuaruanded sama koostisaine klassi ja eelistatavalt valmispreparaadi kohta

 

Ärge kasutage "looduslikku" ohutusjäreldusena

Kaasasolev patenditekst annab koostisosa botaanilise päritolu põhjal soodsa ohutusavalduse. See väide nõuab kommertskirjastamise kvalifikatsiooni.

FDA selgitab, et koostisosa allikas ei määra selle ohutust: taimset päritolu materjalid võivad sisaldada ka toksilisi või allergeenseid aineid. Ohutust tuleb hinnata ettenähtud kasutustingimuste puhul. (fda.gov)

Sel põhjusel taotlege ohutuse põhjendust, selle asemel, et tugineda eraldiseisvatele tagatistele "looduslikule", "taimsele" või "kõrge puhtusastmele".

 

7. Kuidas peaks bränd uuringut arutama?

Hoidke kolm kihti eraldi:

Mida avalikustamine väidab.

Mida teatatud katsetes mõõdeti.

Mida on näidatud, et valmistoode teeb.

Näiteks "HaCaT rakkudes lipiididega seotud aktiivsust uuritud" on oluliselt erinev "kliiniliselt tõestatud nahabarjääri parandamisest".

Samuti ei tohiks viiteid ekseemi ravile, atoopilise dermatiidi ravile või haavade paranemisele kopeerida otse tavalistesse kosmeetikatoodete väidetesse. Ameerika Ühendriikides võivad väited haiguste ravimise või keha struktuuri või funktsiooni mõjutamise kohta põhjustada toote reguleerimist ravimina. (fda.gov)

Teadusartikkel või patendiviide ei ole iseenesest luba terapeutilise turunduse väite esitamiseks.

8. Soovitatav arengutee

Ettevõtte jaoks, mis kaalub Cistanche päritolu verbaskosiidi, on kasulik arendusjada:

Määratlege kavandatav tootekategooria ja sihtturg.

Valige koostisaine klass ja analüütiline spetsifikatsioon.

Vaadake üle koostis, saasteained, lahustite jäägid ja ohutusdokumentatsioon.

Töötage välja prototüüp ja hinnake koostisosade ühilduvust.

Hinnake koostise ja pakendi stabiilsust.

Viige läbi asjakohased mikrobioloogilised ja ohutushinnangud.

Katsetage valmistoodet kavandatud toimivusnõuetega.

Enne käivitamist vaadake üle lõplik veebisait, silt ja reklaamikeel.

Avalikustamise kontsentratsioonivahemik0.01%–5.0%– tuleks käsitleda avalikustatud vahemikuna, mitte universaalselt kinnitatud formuleerimissoovitusena.

 

Alumine rida koostisosade ostjatele

Kaasatud uuringud muudavad Cistanche päritolu verbaskosiidi kandidaadiks nahahoolduse edasiseks arendamiseks, eriti projektide jaoks, mis uurivad hüdratatsiooni ja barjääriga seotud laboratoorseid tulemusnäitajaid.

 

Cistanche akteosiidi sisuloend

 

Klõpsake akteosiidi tsitanche ekstrakti loendi erineva sisu külastamiseks

 

 

 

Selle kõige kasulikum õppetund ei ole lihtsalt see, et "Cistanche on nahale hea". See on seeEkstraheerimismeetod, toimeaine sisaldus, koostisosade identsus ja tõendite kvaliteet mõjutavad kõik seda, kas botaaniline koostisosa sobib konkreetse äriprojekti jaoks.

Cistanche'i tootja poole pöördudes alustage täpse taotlusega:

"Palun esitage meie projekti jaoks kavandatud koostisainete klassi botaaniline identiteet, verbaskosiidi spetsifikatsioon, analüüsimeetod, tüüpilised analüüsisertifikaadid, jääklahusti tulemused, ohutusdokumendid ja koostise juhised."

See taotlus loob tootearendusele palju tugevama aluse kui ravimtaimede ekstrakti pulbri üldine päring.

 

(54) Leiutise nimetus

Verbaskosiidi valmistamise meetod ja selle kasutamine naha lipiidide tootmise soodustamiseks

(57) Abstraktne

Verbaskosiidi valmistamise meetod ja meetod selle kasutamiseks naha lipiidide tootmise soodustamiseks Leiutis käsitleb meetodit verbaskosiidi valmistamiseks ja meetodit selle kasutamiseks naha lipiidide tootmise soodustamiseks, mis kuuluvad nahahoolduse ja paiksete toodete tehnikavaldkonda.

Meetod sisaldab järgmisi samme:

Orobanchaceae taimede kuivatatud lihakate varte valimineCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, võiCistanche salsa; varte pulbristamine pärast eeltöötlust; nende ekstraheerimine püstjahuti all 50–80% etanooli vesilahusega kaks kuni neli korda ühe kuni kolme tunni jooksul iga kord; ekstraktide kombineerimine; ja kontsentreerides need alandatud rõhul, kuni etanoolilõhna ei jää, saades seeläbi kontsentreeritud lahuse.

Kontsentreeritud lahuse juhtimine läbi AB-8 makropoorse adsorptsioonivaigu kolonni; lisandite eemaldamiseks elueerides järjestikku deioniseeritud vee ja 30–50% etanooli vesilahusega; seejärel sihtkomponentide elueerimine 60–90% etanooli vesilahusega; eluaadi kogumine ja alandatud rõhu all kontsentreerimine; selle puhastamine silikageeli kolonnkromatograafiaga, kasutades eluendina kloroformi-metanooli mahusuhtes 5:1 kuni 2:1; sihtfraktsioonide kogumine; ja nende kontsentreerimine alandatud rõhul, millele järgneb külmkuivatamine, et saada puhastatud verbaskosiid.

Leiutise kasulikud mõjud seisnevad selles, et verbaskosiid kaitseb nahka ja avaldab toodetesse lisamisel paremat nahahooldusaktiivsust.

 

Nõuded

Nõue 1

Meetod verbaskosiidi valmistamiseks, mida iseloomustab see, et see sisaldab järgmisi samme:

Orobanchaceae taimede kuivatatud lihakate varte valimineCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, võiCistanche salsa; nende pulbristamine pärast eeltöötlust; nende ekstraheerimine püstjahuti all 50–80% etanooli vesilahusega kaks kuni neli korda ühe kuni kolme tunni jooksul iga kord; ekstraktide kombineerimine; ja kontsentreerides need alandatud rõhul, kuni etanoolilõhna ei jää, saades seeläbi kontsentreeritud lahuse.

Kontsentreeritud lahuse juhtimine läbi AB-8 makropoorse adsorptsioonivaigu kolonni; lisandite eemaldamiseks elueerides järjestikku deioniseeritud vee ja 30–50% etanooli vesilahusega; seejärel sihtkomponentide elueerimine 60–90% etanooli vesilahusega; eluaadi kogumine ja alandatud rõhu all kontsentreerimine; selle puhastamine silikageeli kolonnkromatograafiaga, kasutades eluendina kloroformi-metanooli mahusuhtes 5:1 kuni 2:1; sihtfraktsioonide kogumine; nende kontsentreerimine alandatud rõhu all; ja nende külmkuivatamine, et saada puhastatud verbaskosiid, mille puhtus on vähemalt 98%.

 

Nõue 2

2. Meetod verbaskosiidi valmistamiseks vastavalt punktile 1, mis erineb selle poolest, et materjali ja lahusti suhe püstjahutiga ekstraheerimisel on vahemikus 1:10 kuni 1:20 ja ekstraheerimistemperatuur on vahemikus 60 kuni 80 kraadi.

 

Nõue 3

2. Meetod verbaskosiidi valmistamiseks vastavalt punktile 1, mis erineb selle poolest, et makropoorse adsorptsioonivaigu kolonni AB-8 läbimõõdu ja kõrguse suhe on vahemikus 1:8 kuni 1:15 ja elueerimise voolukiirus on vahemikus 1 kuni 3 BV/h.

 

4. väide

2. Meetod verbaskosiidi valmistamiseks vastavalt punktile 1, mis erineb selle poolest, et külmkuivatamise tingimused hõlmavad temperatuuri vahemikus -40 kraadi kuni -50 kraadi, vaakumrõhku vahemikus 10 kuni 30 Pa ja kuivatusaega 12 kuni 24 tundi.

 

Nõue 5

5. Meetod verbaskosiidi pealekandmiseks, et soodustada naha lipiidide tootmist, kasutades vastavalt mis tahes nõudluspunktile 1-4 valmistatud verbaskosiidi, mis erineb selle poolest, et pealekandmismeetod sisaldab:

Verbaskosiidi lisamine paiksele tootealusele etteantud massifraktsioonis ja ühtlane segamine valmistoote saamiseks; valmistoote kandmine nahapinnale üks või kaks korda päevas; võimaldades verbaskosiidil tungida ja mõjuda epidermaalsetele HaCaT rakkudele, et reguleerida üles ACC, FASN ja N-SMaasi geeni- ja valguekspressiooni ning suurendada rasvhapete süntaasi aktiivsust; ja kasutamise jätkamine ühe kuni nelja nädala jooksul, et tõhustada naha lipiidide sünteesi.

Verbaskosiid soodustab HaCaT rakkude proliferatsiooni, haavade paranemist, tiheda ühendusega valkude ekspressiooni ning lipiidide ja hüaluroonhappe tootmist, pakkudes seeläbi mitme sihtmärgiga barjääri parandavaid funktsioone.

Seda kasutatakse kogu nahabarjääri hooldusahelas, mis hõlmab epidermise rakkude uuenemist, tugevdatud rakkudevahelisi ühendusi, lipiidide maatriksi täiendamist ja hüaluroonhappe sünteesi loomuliku niisutava tegurina.

 

6. väide

6. Pealekandmismeetod vastavalt punktile 5, mis erineb selle poolest, et verbaskosiidi massiosa paikses tootes on vahemikus 0,01% kuni 5,0%.

 

Nõue 7

6. Pealekandmismeetod vastavalt punktile 5, mis erineb selle poolest, et ühe pealekandmise kohta kasutatakse 0,1-0,5 g valmistoodet, millele järgneb imendumise soodustamiseks õrn massaaž ühe kuni kolme minuti jooksul.

 

Nõue 8

6. Nõudluspunktile 5 vastav pealekandmismeetod, kusjuures paikseks tooteks on meditsiiniline side, protseduurijärgne parandustoode, atoopilise dermatiidi lisaravitoode, spetsiaalselt tundlikule nahale mõeldud nahahooldustoode või intensiivselt niisutav ja taastav nahahooldustoode.

 

Nõue 9

6. Pealekandmismeetod vastavalt punktile 5, mis erineb selle poolest, et verbaskosiidi pealekandmise ajal võib lisaks lisada abiaineid.

 

Nõue 10

10. Nõudluspunktile 9 vastav pealekandmismeetod, mis erineb selle poolest, et abiaine on valitud niisutaja, emulgaatori, säilitusaine, lõhnaaine või rahustava aine hulgast ning abiainet sisaldava kompositsiooni ravimvorm valitakse losjooni, kreemi, geeli, seerumi või lehtmaski lahuse hulgast.

 

Verbaskosiidi valmistamise meetod ja selle kasutamine naha lipiidide tootmise soodustamiseks

 

Tehniline valdkond

[0001]Leiutis kuulub nahahooldus- ja paiksete toodete tehnikavaldkonda. Eelkõige käsitleb see meetodit verbaskosiidi valmistamiseks ja meetodit selle kasutamiseks naha lipiidide tootmise soodustamiseks.

Täpsemalt puudutab see verbaskosiidi valmistamismeetodit, mille eesmärk on avaldada mõju epidermise rakkude uuenemise täielikule nahabarjääri parandamise järjestusele → tõhustatud rakkudevahelised tihedad ühendused → lipiidide maatriksi täiendamine → hüaluroonhappe süntees → haavade paranemine, kasutamiseks naha kaitsmisel.

 

Taust Art

[0002]Nahabarjääri homöostaasi säilitamisel mängivad asendamatut rolli epidermise rakkude uuenemine, tugevdatud rakkudevahelised tihedad ühendused, lipiidide maatriksi täiendamine, hüaluroonhappe süntees ja haavade paranemine.

Epidermise rakkude uuenemine on barjääri ehitamise alus. Kiirendades basaalkeratinotsüütide proliferatsiooni ja diferentseerumist, tagab see piisava hulga rakkude korrapärase liikumise ülespoole, varustades barjääri moodustamiseks piisavat rakumaterjali.

Rakkudevahelised ühendusstruktuurid, sealhulgas tihedad ühendused ja desmosoomid, ankurdavad äsja moodustunud rakud kokku, et luua tihe pidev füüsiline barjäär, mis takistab tõhusalt väliste ärritajate sisenemist.

Rakkudevahelisi ruume täitev lipiidmaatriks moodustab organiseeritud lamellstruktuuri ja on peamine vahend vee kaotsiminekuteed sulgemiseks.

Epidermises ja pärisnahas sünteesitud hüaluroonhape moodustab võimsa vettpidava võrgustiku, varustab sarvkihti niiskusega ja säilitab rakkude homöostaasi. Samuti võib see pakkuda nende füsioloogiliste protsesside jaoks sobivat niisket keskkonda ja edastada rakulisi signaale.

Haavade paranemine sõltub suuresti neist neljast protsessist. Esiteks tagab hüaluroonhape ajutise maatriksi ja signaalimisfunktsioonid. Seejärel on haava katmiseks vajalik epidermise rakkude uuendamine. Äsja moodustunud rakud peavad barjäärifunktsiooni taastamiseks taastama tihedad ristmikud ja täiendama lipiidmaatriksit.

Need viis protsessi käivitatakse järjestikku haava paranemise ajal. Nende omavahel seotud, kooskõlastatud tegevused – alates rakkude uuenemisest ja struktuuri tugevdamisest kuni maatriksi täitmise ja vee säilitamiseni – viivad ühiselt täielikult stabiliseeritud nahabarjäärini.

Need ei taga mitte ainult füüsilist jõudu, mis on vajalik väliste ärritajate vastu seismiseks, vaid ka niiskuse säilitamise võime, mis on vajalik sisemise veekao vältimiseks, võimaldades nahal säilitada pikaajalist tervist dünaamilises tasakaalus.

Sellest tulenevalt on mitmemõõtmeline süstemaatiline rekonstrueerimine olulisem kui pelgalt pinnaniiskuse parandamine. See võib parandada naha vastupidavust ja niiskuse säilimist nende tekkekohas, toetades vastupidavamat ja stabiilsemat tervislikku seisundit.

[0003]Naha enda lipiidide ja hüaluroonhappe tootmine on naha tervise säilitamise, keskkonnaärrituse vastu võitlemise ja noorusliku seisundi säilitamise jaoks ülioluline.

Niiskuse säilitamise ja mikroorganismide ja saasteainete eest kaitsmise kaudu aitavad need ained tagada naha normaalse füsioloogilise funktsiooni.

Võrreldes ainult välise toidulisandiga, kirjeldatakse naha enda lipiidide ja hüaluroonhappe tootmise soodustamist kui fundamentaalsemat ja vastupidavamat strateegiat, mis tugevdab otseselt selle "eneseparandusvõimet" ja "resistentsust".

Nahahaiguste, nagu atoopiline dermatiit ja ekseem, puhul kirjeldatakse lipiidide ja hüaluroonhappe tootmise tugevdamist kui keskse ennetava ja terapeutilise tähtsusega.

Allikas selgitab, et need seisundid hõlmavad sageli geneetilisi defekte, mis nõrgendavad naha "telliskivi ja mördi" struktuuri, võimaldades allergeenidel ja ärritajatel kergemini tungida ning käivitada püsiva immuun-põletikulise tsükli.

Seetõttu saab selliste aktiivsete koostisosade tuvastamine, mis aktiveerivad peamisi lipiidide sünteesi ensüüme, nagu FASN ja ACC, või indutseerivad otseselt hüaluroonhappe tootmist, ennetavalt säilitada ja parandada raku lipiidide ja hüaluroonhappe tootmist.

Vastavalt avalikustamisele võib see strateegia leevendada kuivust, sügelust ja põletikulisi episoode, vähendades samal ajal väliseid vallandajaid nende allikas, vähendades kordumise sagedust ja raskust ning aidates nihutada haiguse juhtimist passiivselt ravilt aktiivsele ennetamisele.

 

[0004]Verbaskosiid on fenüületanoidglükosiid ja üks Orobanchaceae taimede peamisi koostisosi:

Cistanche deserticolaYC Ma;

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight;

Cistanche sinensisBeck; ja

Cistanche salsa(CA Mey.) Beck.

 

Uuringud on näidanud, et verbaskosiid on tugev antioksüdant ja sellel on farmakoloogiline toime, sealhulgas põletikuvastane, neuroprotektiivne, hepatoprotektiivne ja vananemisvastane toime.

Paljude taimede nahka kaitsvate ainete skriinimise käigus leidsid leiutajad, et verbaskosiid mitte ainult ei soodusta HaCaT rakkude proliferatsiooni ja tiheda ühendusega valgu ekspressiooni, vaid reguleerib ka rasvhapete süntaasi aktiivsust, suurendades seeläbi naha lipiidide sünteesi.

Samuti aktiveerib see hüaluroonhappe tootmisega seotud radu ja soodustab seejärel haavade paranemist.

Need toimingud hõlmavad epidermise rakkude uuenemise täielikku nahabarjääri hooldamise ja parandamise järjestust → tõhustatud rakkudevahelisi ühendusi → lipiidide maatriksi täiendamist → hüaluroonhappe sünteesi → haavade paranemist.

Seetõttu võib verbaskosiidi kasutada mitme sihtmärgiga nahka kaitsva ja niisutava vahendina funktsionaalsetes nahahooldus- ja paiksetes toodetes.

Näited hõlmavad meditsiinilisi sidemeid ja protseduurijärgseid parandustooteid; atoopilise dermatiidi või ekseemi abiained; nahahooldustooted, mis on spetsiaalselt ette nähtud tundlikule nahale või rosaatseale; ja intensiivselt niisutavad ja parandavad tooted igapäevaseks kasutamiseks.

 

Leiutise kokkuvõte

[0005]Leiutis pakub meetodi verbaskosiidi valmistamiseks ja meetodi selle kasutamiseks naha lipiidide tootmise soodustamiseks.

Valmistamismeetod puudutab verbaskosiidi, mis on ette nähtud epidermise rakkude uuenemise täieliku nahabarjääri parandamise jada → tugevdatud rakkudevahelised ühendused → lipiidide maatriksi täiendamine → hüaluroonhappe süntees → haavade paranemine.

See käsitleb tehnilist probleemi, mis seisneb nahahoolduse või paiksete toodete jaoks uue mitme sihtmärgiga toimeaine pakkumisel.

Kirjeldatakse, et verbaskosiidi eeliseks on see, et see toimib kogu nahabarjääri parandamise ahelas, omades paremat toimet kui olemasolevad ühe sihtmärgiga nahahoolduse koostisosad, näiteks koostisosad, mis soodustavad ainult hüaluroonhappe sünteesi, soodustavad ainult rakkude proliferatsiooni või niisutavad üksi.

[0006]Eeltoodud eesmärkide saavutamiseks kasutab leiutis järgmist tehnilist lahendust.

[0007]Verbaskosiidi valmistamise meetod sisaldab järgmisi samme.

[0008]Valige Orobanchaceae taimede kuivatatud lihavad varredCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, võiCistanche salsa.

Pärast blanšeerimist, kuivatamist ja peenestamist ekstraheerige materjal püstjahuti all 50–80% etanooli vesilahusega kaks kuni neli korda, iga kord üks kuni kolm tundi.

Kombineerige ekstraktid ja kontsentreerige need alandatud rõhul, kuni etanoolilõhn ei kao, saades seeläbi kontsentreeritud lahuse.

[0009]Laske kontsentreeritud lahus läbi AB-8 makropoorse adsorptsioonvaigu kolonni.

Lisandite eemaldamiseks elueerige järjestikku deioniseeritud vee ja 30–50% etanooli vesilahusega, seejärel sihtkomponentide elueerimiseks 60–90% etanooli vesilahusega.

Koguge eluaat kokku ja kontsentreerige see alandatud rõhu all.

Puhastage kontsentraat silikageeli kolonnkromatograafiaga, kasutades eluendina kloroformi-metanooli mahusuhtes 5:1 kuni 2:1.

Koguge sihtfraktsioonid kokku, kontsentreerige need alandatud rõhul ja külmkuivatage, et saada puhastatud verbaskosiid, mille puhtus on vähemalt 98%.

[0010]Valikuliselt on materjali ja lahusti suhe püstjahutiga ekstraheerimisel vahemikus 1:10 kuni 1:20, väljendatuna g/ml, ja ekstraheerimistemperatuur on vahemikus 60 kuni 80 kraadi.

Tõlkija märkus: allikas märgitakse lisaks, et see suhe tähendab "1 ml lahustile lisatakse 1 g toorainet". See väide on vastuolus määratud vahemikuga 1:10–1:20, mis vastab 10–20 ml lahustile toormaterjali grammi kohta.

[0011]Valikuliselt on makropoorse adsorptsioonvaigu kolonni AB-8 läbimõõdu ja kõrguse suhe vahemikus 1:8 kuni 1:15, kus suhe on kolonni läbimõõt d ja kolonni kõrgus h. Elueerimise voolukiirus on vahemikus 1 kuni 3 BV/h.

[0012]Valikuliselt hõlmavad külmkuivatamise tingimused temperatuuri vahemikus -40 kraadi kuni -50 kraadi, vaakumrõhku vahemikus 10 kuni 30 Pa ja kuivamisaega 12 kuni 24 tundi.

[0013]Verbaskosiidi pealekandmise meetod naha lipiidide tootmise soodustamiseks on esitatud järgmiselt.

[0014]Lisage verbaskosiid paiksele tootealusele eelnevalt kindlaksmääratud massifraktsioonis ja segage valmistoote saamiseks ühtlaselt.

Kandke valmistoode nahapinnale üks või kaks korda päevas.

Läbi tungimise mõjub verbaskosiid epidermaalsetele HaCaT rakkudele, soodustades rakkude proliferatsiooni ja tugevdades tihedaid ühendusi.

Samal ajal reguleerib see üles ACC, FASN ja N-SMaasi geeni- ja valguekspressiooni, suurendab rasvhapete süntaasi aktiivsust, reguleerib üles HAS2, HAS3 ja CD44 ning suurendab hüaluroonhappe sisaldust.

Jätkake kasutamist üks kuni neli nädalat, et saavutada üldine nahabarjääri paranemine.

[0015]Valikuliselt on verbaskosiidi massiosa paikse tootes vahemikus 0,01% kuni 5,0%.

[0016]Soovi korral kasutage 0,1–0,5 g valmistoodet ühe kasutuskorra kohta ja masseerige õrnalt üks kuni kolm minutit pärast pealekandmist, et soodustada imendumist.

[0017]Valikuliselt on paikseks kasutamiseks mõeldud ravimside, protseduurijärgne parandustoode, atoopilise dermatiidi lisaravitoode, spetsiaalselt tundlikule nahale mõeldud nahahooldustoode või intensiivselt niisutav ja taastav nahahooldustoode.

[0018]Valikuliselt võib verbaskosiidi pealekandmise ajal lisada ka abiaineid.

[0019]Lisaks valitakse abiaine niisutaja, emulgaatori, säilitusaine, lõhnaaine või rahustava aine hulgast.

Abiainet sisaldava kompositsiooni ravimvorm valitakse losjooni, kreemi, geeli, seerumi või lehtmaski lahuse hulgast.

 

Leiutise kasulikud tagajärjed

[0020]Leiutise kasulikud mõjud on järgmised.

[0021]Leiutis näitab, et verbaskosiidil on põhitegevused naha lipiidide ja hüaluroonhappe tootmise soodustamisel.

Samuti võib see soodustada naharakkude proliferatsiooni, tugevdada rakkudevahelisi tihedaid ühendusi ja kiirendada haavade paranemist, moodustades suletud ahela mehhanismi "edendab rakkude proliferatsiooni → stabiliseerib rakkudevahelisi ühendusi → suurendab lipiidide ja hüaluroonhappe tootmist → kiirendab paranemist ja paranemist."

Võrreldes tehnika tasemega on leiutist kirjeldatud järgmiste eelistena.

[0022]Verbaskosiid on looduslik taimne toimeaine, millel on kõrge ohutustase ja selgelt määratletud farmakoloogiline aktiivsus, mis väldib keemiliselt sünteesitud koostisosadega seotud võimalikke nahaärrituse riske.

Toimetaja kvalifikatsioon: see on allika ohutusalane väide, mitte ainult botaanilise päritolu põhjal tehtud järeldus.

[0023]Verbaskosiidi valmistamise efektiivsus ja saagis paranevad.

[0024]Verbaskosiid toimib laiaulatuslikul hulgal sihtmärkidel, reguleerides samaaegselt mitmeid võtmeprotsesse, sealhulgas rakkude proliferatsiooni, tiheda ühendusega valkude ekspressiooni, lipiidide sünteesi, hüaluroonhappe tootmist ja haavade paranemist.

See parandab seega integreeritud viisil naha kaitsefunktsiooni, mille mõju on kirjeldatud ühe sihtmärgiga koostisosade omadest paremana.

[0025]Selle rakendused on laialdased, sealhulgas meditsiiniline parandamine, nahahaiguste täiendav ravi, tundliku naha hooldus ning igapäevane niisutamine ja parandamine, mis vastab erinevate elanikkonnarühmade nahatervise vajadustele.

 

Jooniste lühikirjeldus

[0026]Leiutise teostuste või varasema tehnika tehniliste lahenduste selgemaks selgitamiseks on allpool lühidalt toodud teostuste või tehnika taseme kirjeldamiseks vajalikud joonised.

Allpool kirjeldatud joonised kujutavad ainult teatud leiutise teostusi. Eriala asjatundja võib neilt ilma loomingulise pingutuseta muid jooniseid teha.

[0027]Joonisel fig 1 on kujutatud leiutise valmistamismeetodi skemaatiline vooskeem.

[0028]Joonisel 2 on esitatud HaCaT rakkude elujõulisuse andmed.

[0029]Joonisel 3 on toodud andmed rasvhapete süntaasi aktiivsuse kohta.

[0030]Joonisel 4 on esitatud andmed hüaluroonhappe sisalduse kohta.

[0031]Joonisel 5 on esitatud HaCaT rakkude elujõulisuse andmed leiutise kohta.

[0032]Joonisel fig 6 on toodud leiutisekohased rasvhapete süntaasi aktiivsuse andmed.

[0033]Joonisel 7 on näidatud rasvhapete sünteesiga seotud geenide ekspressioon.

[0034]Joonisel 8 on näidatud rasvhapete sünteesiga seotud valkude ekspressioon.

[0035]Joonisel 9 on toodud rasvhapete sünteesiga seotud Western blot tulemused.

[0036]Joonisel 10 on esitatud andmed hüaluroonhappe sisalduse kohta.

[0037]Joonisel 11 on kujutatud hüaluroonhappe sünteesiga seotud geenide ekspressiooni.

[0038]Joonisel 12 on kujutatud hüaluroonhappe sünteesiga seotud valkude ekspressiooni.

[0039]Joonisel 13 on esitatud hüaluroonhappega seotud Western blot tulemused.

[0040]Joonisel 14 on kujutatud claudin-1 ekspressioonitasemed.

[0041]Joonisel 15 on kujutatud okludiini ekspressioonitasemed.

[0042]Joonisel 16 on kujutatud haava sulgumise kiirust.

[0043]Joonisel 17 on kujutatud raku kriimustustesti kujutised.

[0044]Joonisel 18 on esitatud hinnang erinevate proovide niisutava toime kohta.

 

Teostuste üksikasjalik kirjeldus

[0045]Rakenduse teostusi kirjeldatakse üksikasjalikult allpool koos viidetega kaasnevatele joonistele.

Näide 1: Puhastatud verbaskosiidi valmistamine

[0046]Näide 1.

[0047]Nagu on näidatud joonisel 1, pakub see näide verbaskosiidi (lühendatult Ver) valmistamise meetodit, mis hõlmab järgmisi etappe.

[0048]Valige kuivatatud lihavad varredCistanche deserticolavõiCistanche tubulosa, mõlemad kuuluvad sugukonda Orobanchaceae.

Viilutage materjal, blanšeerige keevas vees 10–25 minutit ja kuivatage ahjus 40–60 kraadi juures, suurendades verbaskosiidi sisaldust enam kui neljakordseks.

 

 

Märkus.* vs. tühi kontrollrühm, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Pärast peenestamist ekstraheerige materjal püstjahuti all 50–80% etanooli vesilahusega kaks kuni neli korda, iga kord üks kuni kolm tundi.

Kombineerige ekstraktid ja kontsentreerige need alandatud rõhul, kuni etanoolilõhn ei kao, saades seeläbi kontsentreeritud lahuse.

 

[0049]Laske kontsentreeritud lahus läbi AB-8 makropoorse adsorptsioonvaigu kolonni.

Lisandite eemaldamiseks elueerige järjestikku deioniseeritud vee ja 30–50% etanooli vesilahusega, seejärel sihtkomponentide elueerimiseks 60–90% etanooli vesilahusega.

Koguge eluaat kokku ja kontsentreerige see alandatud rõhu all.

Puhastage see silikageeli kolonnkromatograafiaga, kasutades eluendina kloroformi-metanooli mahusuhtes 5:1 kuni 2:1.

Koguge sihtfraktsioonid kokku, kontsentreerige need alandatud rõhul ja külmkuivatage, et saada puhastatud verbaskosiid, mille puhtus on vähemalt 98%.

[0050]Täpsemalt on materjali ja lahusti suhe püstjahutiga ekstraheerimisel vahemikus 1:10 kuni 1:20 ja ekstraheerimistemperatuur vahemikus 60 kuni 80 kraadi.

[0051]Makropoorse adsorptsioonvaigu kolonni AB-8 läbimõõdu ja kõrguse suhe on vahemikus 1:8 kuni 1:15 ja elueerimise voolukiirus on vahemikus 1 kuni 3 BV/h.

[0052]Külmkuivatamise tingimused hõlmavad temperatuuri vahemikus -40 kraadi kuni -50 kraadi, vaakumrõhku vahemikus 10 kuni 30 Pa ja kuivamisaega 12 kuni 24 tundi.

 

Tabel 2. Erinevate proovide bioaktiivsuse kokkuvõte

Indeks	Tühi kontroll	Positiivne kontroll	CTE	Ech	Ver
Rakkude elujõulisus (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
FAS-i aktiivsus (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
HA sisaldus (ng/ml)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Claudin-1 ekspressioon (pg/ml)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Occludiini ekspressioon (pg/ml)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
24 h haavade paranemise kiirus (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
48 h haavade paranemise kiirus (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Märkus.* vs. tühi kontrollrühm, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Näide 2: Cistanche polüsahhariidi ekstrakti valmistamine

[0053]Näide 2.

[0054]Ekstraheerige Cistanche kaks korda kuumutatud püstjahuti all 20- ja 15-kordses koguses vett vastavalt kolm tundi ja kaks tundi.

Filtreerige, ühendage filtraadid ja kontsentreerige temperatuuril 80–90 kraadi.

Lisage 215 ml 95% etanooli, et saavutada etanooli lõppkontsentratsioon 80%, ja jätke ööseks temperatuurile 4 °C.

Sade kogutakse kokku kas filtrimise teel, säilitades filtrikooki, või tsentrifuugimisega kiirusel 4000 p/min 10 minutit.

Peske sadet kolm korda absoluutse etanooliga ja kuivatage 50 kraadi juures, et saada Cistanche polüsahhariidi ekstrakt, tähistusega POL.

 

Näide 3: Fenüületanoidglükosiidi ekstrakti valmistamine

[0055]Näide 3.

[0056]Ekstraheerige Cistanche kaks korda kuumutatud püstjahuti all 20- ja 15-kordses koguses vett vastavalt kolm tundi ja kaks tundi.

Filtreerige, ühendage filtraadid ja kontsentreerige temperatuuril 80–90 kraadi.

Lisage 215 ml 95% etanooli, et saavutada etanooli lõppkontsentratsioon 80%, ja jätke ööseks temperatuurile 4 °C.

Filtraat kogutakse filtrimise teel või supernatant tsentrifuugimisega kiirusel 4000 p/min 10 minutit.

Kontsentreerige ja kuivatage, et saada Cistanche fenüületanoidglükosiidi ekstrakt, tähisega POLS.

Testimine näitas ehhinakosiidisisaldust 21,8% ja verbaskosiidi sisaldust 1,2%.

 

Näide 4: Ekstrakti RE1 valmistamine

[0057]Näide 4.

[0058]LeotaCistanche deserticolakuuekordses koguses 52% etanoolis toatemperatuuril 10 päeva jooksul.

Filtreerige ja säilitage taimejäägid.

Pärast kuivatamist ekstraheerige jääk kaks tundi püstjahuti all kuuekordse koguse 95% etanooliga.

Filtreerige, ühendage filtraadid, kontsentreerige 60 kraadi juures ja kuivatage, et saada Cistanche fenüületanoidglükosiidide ja nende derivaatide ekstrakt, tähisega RE1.

Ekstrakt sisaldab koostisosi, sealhulgas ehhinakosiidi, verbaskosiidi, isoverbaskosiidi ja 2'-atsetüülverbaskosiidi.

 

Näide 5: Ekstrakti RE2 valmistamine

[0059]Näide 5.

[0060]VäljavõteCistanche tubulosakaks korda 75% etanooliga, iga kord üks tund.

Filtreerige ja säilitage jääk.

Pärast kuivatamist ekstraheerige jääk kaks tundi püstjahuti all kuuekordse koguse 95% etanooliga.

Filtreerige, ühendage filtraadid, kontsentreerige 60 kraadi juures ja kuivatage, et saada Cistanche fenüületanoidglükosiidide ja nende derivaatide ekstrakt, tähisega RE2.

Ekstrakt sisaldab koostisosi, sealhulgas ehhinakosiidi, verbaskosiidi, isoverbaskosiidi ja 2'-atsetüülverbaskosiidi.

 

Näide 6: Fenüületanoidglükosiidi koguekstrakti valmistamine

[0061]Näide 6.

[0062]Viilutage Cistanche ja ekstraheerige kaks korda 75% etanoolilahusega, iga kord 1,5 tundi.

Kombineerige ekstraktid, kontsentreerige ja kuivatage, et saada Cistanche fenüületanoidglükosiidi ekstrakt, tähisega CTE.

Testimine näitas ehhinakosiidisisaldust 22,6% ja verbaskosiidisisaldust 4,5%.

 

Näide 7: pealekandmismeetod

[0063]Näide 7.

[0064]Tuginedes näitele 1, pakub see näide rakendusmeetodit, mille kaudu verbaskosiid avaldab mõju epidermise rakkude uuenemise täielikule nahabarjääri parandusjärjestusele → tõhustatud rakkudevahelised ühendused → lipiidide maatriksi täiendamine → hüaluroonhappe süntees → haavade paranemine.

Konkreetne pealekandmisviis on järgmine.

[0065]Lisage verbaskosiid paiksele tootealusele eelnevalt kindlaksmääratud massifraktsioonis ja segage valmistoote saamiseks ühtlaselt.

Kandke valmistoode nahapinnale üks või kaks korda päevas.

Läbi tungimise mõjub verbaskosiid epidermaalsetele HaCaT rakkudele, soodustades rakkude proliferatsiooni ja tugevdades tihedaid ühendusi.

Samal ajal reguleerib see üles ACC, FASN ja N-SMaasi geeni- ja valguekspressiooni, suurendab rasvhapete süntaasi aktiivsust, reguleerib üles HAS2, HAS3 ja CD44 ning suurendab hüaluroonhappe sisaldust.

Jätkake kasutamist üks kuni neli nädalat, et saavutada üldine nahabarjääri paranemine.

[0066]Täpsemalt, verbaskosiidi massiosa paikse toote puhul on vahemikus 0,01% kuni 5,0%.

[0067]Kasutage 0,1–0,5 g valmistoodet ühe kasutuskorra kohta ja masseerige õrnalt üks kuni kolm minutit pärast pealekandmist, et soodustada imendumist.

[0068]Toopiline toode on meditsiiniline side, protseduurijärgne parandustoode, atoopilise dermatiidi lisaravitoode, spetsiaalselt tundlikule nahale mõeldud nahahooldustoode või intensiivselt niisutav ja taastav nahahooldustoode.

[0069]Verbaskosiidi manustamise ajal võib lisada ka abiaineid.

Lisaks valitakse abiaine niisutaja, emulgaatori, säilitusaine, lõhnaaine või rahustava aine hulgast.

Abiainet sisaldava kompositsiooni ravimvorm valitakse losjooni, kreemi, geeli, seerumi või lehtmaski lahuse hulgast.

 

Näide 8: Katsematerjalid ja -seadmed

[0070]Näide 8.

[0071]Tuginedes näidetele 1 ja 7, on leiutises kasutatud katsematerjalid järgmised.

[0072]Eksperimentaalsed rakud olid immortaliseeritud inimese epidermise HaCaT rakud, mis osteti ettevõttest Shanghai Yaji Biotechnology.

Rakke kultiveeriti kõrge glükoosisisaldusega DMEM-is, millele oli lisatud 10% veise loote seerumit ja 1% penitsilliini-streptomütsiini 37 kraadi juures atmosfääris, mis sisaldas 5% süsinikdioksiidi küllastunud niiskuse juures.

[0073]Katsematerjalid olid:

Ehhinakosiid, lühendatult Ech, pärit Hiina riiklikest toidu- ja ravimikontrolliinstituutidest.

Veise looteseerum, FBS, firmalt EXCELL.

Kõrge glükoosisisaldusega DMEM firmalt Gibco.

0,25% trüpsiin-EDTA firmalt Gibco.

Fosfaatpuhverdatud soolalahuse pulber firmalt Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology.

CCK-8 TransGen Biotechi rakkude proliferatsiooni/tsütotoksilisuse analüüsi komplekt.

Human Occludin, OCLN, ELISA komplekt Wuhanist CUSABIO.

Inimese Claudin-1, CLDN1, ELISA komplekt Wuhanist CUSABIO.

Rasvhapete süntaas, FAS, Solarbio aktiivsusanalüüsi komplekt.

Inimese hüaluroonhappe ELISA komplekt Wuhan CUSABIOst.

Rekombinantne inimese EGF-valk, kandjavaba, firmalt R&D Systems.

DEPC firmalt Amresco.

M5 HiClear DL2000 DNA marker firmalt Mei5 Biotechnology.

Ambioni TRIzol reagent.

5X kõik-ühes RT MasterMix firmalt abm.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–Low ROX alates abm.

Easy II Protein Quantitative Kit, BCA, firmalt TransGen Biotech.

RIPA lüüsipuhver firmalt Boster.

Proteaasi inhibiitor firmalt Boster.

Kitse Küülikuvastane IgG H&L, HRP, firmalt Abcam.

Kitse hiirevastane IgG H&L, HRP, firmalt Abcam.

Eelvärvitud valgumarker firmalt Solarbio.

-Merkaptoetanool firmalt Amresco.

PVDF-i ülekandemembraan, 0,45 μm, firmalt Millipore.

Glütsiin firmalt Sangon Biotech.

Glütserool firmalt Sangon Biotech.

SuperSignal West Pico PLUS firmalt Thermo Fisher.

Beeta-aktiini laadimist kontrolliv antikeha, hiire monoklonaalne, firmalt Sino Biological.

Affinity ACC1 antikeha.

Affinity FASN-i antikeha.

Affinity SMPD2 antikeha.

Hüaluronaani süntaasi 2 antikeha, HAS2, firmalt Affinity.

Affinity antikeha HAS3.

Afiinsuse CD44 antikeha.

[0074]Katseseadmed koosnesid:

SmartCell HF-90 süsinikdioksiidi rakukultuuri inkubaator, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

Sama tootja bioloogiline turvakapp HF1200LC.

DK-80 madala kiirusega lauatsentrifuug, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Heraeus Multifuge X1R kiire jahutustsentrifuug, Thermo Fisher Scientific.

xMark mikroplaadi spektrofotomeeter, Bio-Rad.

GL-88B vortex mixer, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Model 2500 geelpildisüsteem, Shanghai Tianneng.

MyCycler Thermal Cycler PCR instrument, Bio-Rad.

7500 Fast Real-Time PCR instrument, ABI.

Chemiscope 3000 kemoluminestsentskujutise süsteem, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Mini-PROTEAN Tetra süsteemi valguülekande aparaat, Bio-Rad.

DYCZ-24DN elektroforeesiaparaat, Beijing Liuyi.

Tõlkija märkus: ülaltoodud tootja ja instrumendi kirjeldused järgivad kaasasolevat allikat; kataloogi üksikasju ei kontrollitud sõltumatult.

 

 

 

Näide 9: Katsemeetodid

[0075]Näide 9.

[0076]Tuginedes näidetele 1–8, olid leiutises kasutatud katsemeetodid järgmised.

CCK-8 Rakkude proliferatsiooni analüüs

[0077]Valmistage HaCaT rakkudest üherakuline suspensioon täiskultuurisöötmes tihedusega 5 × 1045 × 10 ^ 45 × 104 rakku/ml.

Külvake rakud 96 süvendiga plaadile 100 µl süvendi kohta.

Pärast rakkudel 24 tundi kinnitumist 37 kraadi juures 5% süsinikdioksiidi keskkonnas visake sööde ära ja manustage erinevaid uuritavaid aineid. Kaasake tühi kontrollrühm n=5n=5n=5.

Pärast 48-tunnist töötlemist visake sööde ära ja lisage igasse süvendisse 100 μL värskelt valmistatud 10% CCK-8 lahust.

Jätkake inkubeerimist rakukultuuri inkubaatoris üks tund, seejärel mõõtke optiline tihedus 450 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat.

Rasvhapete süntaasi aktiivsuse test

[0078]Valmistage HaCaT rakkudest üherakuline suspensioon täiskultuurisöötmes tihedusega 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 rakku/ml ja külvake rakud kultiveerimiskolbidesse.

Pärast rakkudel 24 tundi kinnitumist 37 kraadi juures 5% süsinikdioksiidi keskkonnas visake sööde ära ja manustage erinevaid uuritavaid aineid.

Kaasake tühi kontrollrühm ja positiivne kontrollrühm, keda raviti inimese epidermaalse rekombinantse kasvufaktoriga rhEGF kontsentratsioonis 20 ng/ml, n=3n=3n=3.

Pärast 48-tunnist töötlemist koguge rakud kokku ja mõõtke rasvhapete süntaasi aktiivsust vastavalt analüüsikomplekti juhistele.

Hüaluroonhappe sisalduse analüüs

[0079]Valmistage HaCaT rakkudest üherakuline suspensioon täiskultuurisöötmes tihedusega 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 rakku/ml ja külvake rakud kultiveerimiskolbidesse.

Pärast rakkudel 24 tundi kinnitumist 37 kraadi juures 5% süsinikdioksiidi keskkonnas visake sööde ära ja manustage erinevaid uuritavaid aineid.

Kaasake tühi kontrollrühm ja positiivne kontrollrühm, keda raviti rhEGF-iga kontsentratsioonis 20 ng/ml, n=3n=3n=3.

Pärast 48-tunnist töötlemist koguge rakukultuuri supernatandid ja mõõtke hüaluroonhappe sisaldust vastavalt analüüsikomplekti juhistele.

Kvantitatiivne pöördtranskriptsiooni PCR

[0080]Valmistage HaCaT rakkude üherakuline suspensioon täiskultuurisöötmes tihedusega 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 rakku/ml ja külvake rakud kuue süvendiga plaatidele.

Pärast rakkudel 24 tundi kinnitumist 37 kraadi juures 5% süsinikdioksiidi keskkonnas visake sööde ära ja manustage erinevaid uuritavaid aineid.

Kaasake tühi kontrollrühm ja positiivne kontrollrühm, keda raviti rhEGF-iga kontsentratsioonis 20 ng/ml, n=3n=3n=3.

Pärast 48-tunnist töötlemist visake supernatant ära ja lisage igasse süvendisse 1 ml TRIzoli rakkude eraldamiseks ja lüüsimiseks, tagades, et reaktiiv katab rakukihi.

Loksutage kultuurianumat korduvalt, kuni rakud vabanevad, ja kandke materjal 1,5 ml mikrotsentrifuugi katsutisse.

Ekstraheerige kogu RNA ja kasutage qRT-PCR-i, et määrata ACC, FASN, N-SMaasi, HAS2, HAS3 ja CD44 ekspressioon.

Western Blotting

[0081]Valmistage HaCaT rakkudest üherakuline suspensioon täiskultuurisöötmes tihedusega 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 rakku/ml ja külvake rakud kultiveerimiskolbidesse.

Pärast rakkudel 24 tundi kinnitumist 37 kraadi juures 5% süsinikdioksiidi keskkonnas visake sööde ära ja manustage erinevaid uuritavaid aineid.

Kaasake tühi kontrollrühm ja positiivne kontrollrühm, keda raviti rhEGF-iga kontsentratsioonis 20 ng/ml, n=3n=3n=3.

Pärast 48-tunnist töötlemist koguge rakud kokku.

Ekstraheerige kogu valk ja kasutage Western blot analüüsi, et määrata ACC, FASN, N-SMaasi, HAS2, HAS3 ja CD44 ekspressioon.

Tight-Junction valgu ekspressiooni hindamine

[0082]Valmistage HaCaT rakkudest üherakuline suspensioon täiskultuurisöötmes tihedusega 5 × 1045 × 10 × 45 × 104 rakku/ml ja külvake rakud kultiveerimiskolbidesse.

Pärast rakkudel 24 tundi kinnitumist 37 kraadi juures 5% süsinikdioksiidi keskkonnas visake sööde ära ja manustage erinevaid uuritavaid aineid.

Kaasake tühi kontrollrühm n=3n ​​= 3n=3.

Pärast 48-tunnist töötlemist koguge rakulüsaadid ja mõõtke okludiin ja claudin-1 ELISA abil vastavalt komplekti juhistele.

Cell Scratch Assay

[0083]Valmistage HaCaT rakkudest üherakuline suspensioon täiskultuurisöötmes tihedusega 5 × 1055 × 10 ^ 55 × 105 rakku/ml.

Külvake 24 süvendiga plaadile 500 μL süvendi kohta.

Pärast rakkude kinnitumist manustage ravi, jagades rakud tühjaks kontrollrühmaks, veise loote seerumiga töödeldud positiivseks kontrollrühmaks ja uuritava aine rühmaks.

Ravi 48 tundi.

Pärast töötlemist tekitage pipetiotsaga õrnalt sirge kriimustus.

Asendage sööde seerumivaba söötmega kõigis rühmades, välja arvatud positiivne kontrollrühm.

Pildistage kriimustatud alad 0, 24 ja 48 tunni pärast.

Kasutage ImageJ-d, et arvutada kriimustusala ja hinnata rakkude migratsioonivõimet.

 

Näide 10: Niiskuse säilitamise hindamine

[0084]Näide 10.

[0085]Ver, Ech või glütseriini sisaldavate seerumite niisutava toime hindamiseks kasutati in vitro gravimeetrilist meetodit.

Kaaluge kindlaksmääratud kogused eeltöödeldud proovi 1, mis sisaldab 2% Ver; Proov 2, mis sisaldab 2% Ech; ja positiivne kontroll, mis sisaldab 5% glütseriini.

Säilitage proove konstantse temperatuuri ja konstantse niiskusega kambris 25 kraadi ja 50% suhtelise õhuniiskuse juures.

Kaaluge proove erinevatel ajahetkedel ja joonistage niiskuse säilimise kõverad.

[0086]Niiskuse säilitamise määr arvutatakse järgmiselt:

Niiskusepeetuse määr (%)=M2−M0M1−M0×100%\\text{Niiskuspeetuse määr (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\times100\\%Niiskuspeetuse määr (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100%

[0087]Kus:

[0088]M0M_0M0 on tühja plaadi mass grammides.

[0089]M1M_1M1 on klaasplaadi mass pärast proovi lisamist, grammides.

[0090]M2M_2M2 on mass grammides pärast mitmetunnist eksikaatoris hoidmist.

Tõlkija märkus: Lõige [0085] kirjeldab säilitamist kontrollitud temperatuuriga ja reguleeritud niiskusega kambris, samas kui [0090] viitab eksikaatorile. Mõlemad kirjeldused on säilinud allikast.

 

Eksperimentaalsed tulemused

[0091]Selle näite katsetulemused on järgmised.

Mõju HaCaT rakkude proliferatsioonile

[0092]Nagu on näidatud joonisel 2, oli erinevatel Cistanche ekstraktidel HaCaT rakkude elujõulisusele erinev mõju.

Ver ja POL suurendasid oluliselt rakkude elujõulisust, kusjuures P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Mõju rasvhapete süntaasi aktiivsusele

[0093]Nagu on näidatud joonisel 3, on sarvkihi rakkudevahelised lipiidid naha "telliskivi-mördi" struktuuri põhikomponendiks.

Keramiidid, kolesterool ja vabad rasvhapped moodustavad kindlates vahekordades tiheda lamellse kahekihilise struktuuri.

Normaalse lipiidide sünteesi säilitamine võib seda struktuuri tugevdada, takistada veekadu, seista vastu välistele kahjustustele, säilitada naha mikrobioomi tasakaalu ja soodustada iseeneslikku taastumist.

See võib seega käsitleda kuivust, tundlikkust ja vähenenud naha kaitsevõimet nende tekkekohas.

[0094]Rasvhapete süntaasi kirjeldatakse kui tuuma kiirust piiravat ensüümi ja keskset toitemootorit, mis reguleerib naha lipiidide sünteesi.

Its principal function is to catalyze the synthesis of palmitic acid, C16:0, from acetyl-CoA and malonyl-CoA. Palmitic acid is described as the principal endogenous long-chain saturated fatty acid in the skin.

Palmitiinhappel on kaks funktsiooni.

Esiteks kasutatakse seda põhilise struktuurilise ehitusplokina vahetult sarvkihi barjääri lipiidide, sealhulgas keramiidide ja vabade rasvhapete sünteesil, mis on lamellse kaksikkihi moodustumise materiaalne alus.

Teiseks saab seda olulise prekursori ja signaalimolekulina edasi töödelda allavoolu elongaaside, nagu ELOVL1, abil väga pika ahelaga rasvhapeteks. Need eristatavad rasvhapped on vajalikud barjääri terviklikkuse tagamiseks.

Seega määrab rasvhapete süntaasi aktiivsus otseselt naha barjäärilipiidide tootmiseks saadaoleva tooraine pakkumise.

Selle funktsiooni ülesreguleerimine on esialgne ja kriitiline samm epidermise lipiidide sünteesi edendamisel ning seeläbi füüsilise nahabarjääri parandamisel ja tugevdamisel, mis lõpuks toetab niiskuse säilitamist ja kaitset.

[0095]Andmed näitasid, et positiivne kontroll rhEGF ja Ver suurendasid oluliselt rasvhapete süntaasi aktiivsust, kusjuures P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, RE1 ja RE2 ei suurendanud rasvhapete süntaasi aktiivsust.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

Tõlkija märkus: allikas sisaldab esmalt RE2 nende materjalide hulgas, mis ei suurendanud aktiivsust, seejärel teatab RE2 ebaolulisest suurenemisest. See ebakõla jääb alles.

 

Mõju hüaluroonhappe sisaldusele

[0096]Nagu on näidatud joonisel 4, on hüaluroonhape nahas looduslikult esinev polüsahhariid, millel on tugev vett siduv võime ja mida allikas kirjeldatakse kui peamiselt pärisnahas ja sarvkihis.

Hüaluroonhappe sisalduse suurenemine võib säilitada niiskust sügavamal tasemel, säilitada terve nahastruktuuri, pakkuda antioksüdantset ja põletikuvastast toimet, soodustada haavade paranemist ja paranemist ning parandada sarvkihi funktsiooni.

Neid mõjusid kirjeldatakse kui seestpoolt niisutamist, täiskõhutunnet ja vastupidavust.

[0097]Andmed näitasid, et positiivne kontroll rhEGF, Ver ja RE2 suurendasid oluliselt hüaluroonhappe sisaldust, kusjuures P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS ja RE1 ei suurendanud hüaluroonhappe sisaldust.

 

Ekstraktiklasside ja puhastatud verbaskosiidi võrdlus

[0098]Cistanche sisaldab peamiselt fenüületanoidglükosiide ja polüsahhariide.

Polüsahhariidi ekstrakti, POL, tegevused; fenüületanoidglükosiidide ekstraktid, POLS, RE1 ja RE2; ja verbascoside, Ver, võrreldi seetõttu.

Tulemused joonistel 2–4 näitavad, et erinevate meetoditega valmistatud Cistanche fenüületanoidglükosiidi ekstraktidel ja üksikutel ühenditel oli erinev toime HaCaT rakkude proliferatsiooni soodustamisel, rasvhapete süntaasi aktiivsuse suurendamisel ja hüaluroonhappe sisalduse suurendamisel.

Ainult Ver näitas tegevust kõigis kolmes valdkonnas, nagu on kokku võetud tabelis 1.

[0099]–[0101] Neid lõikude numbreid ja tabeli 1 sisu esitatud allikas ei sisaldanud. Puuduva materjali tõlkimine ega rekonstrueerimine pole võimalik.

Tabel 1. Erinevate proovide bioaktiivsuse kokkuvõte

Indeks	Tühi kontroll	Positiivne kontroll	POL	POLS	RE1	RE2	Ver
Rakkude elujõulisus (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
FAS-i aktiivsus (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
HA sisaldus (ng/ml)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

CTE, ehhinakosiidi ja verbaskosiidi täiendav võrdlus

[0102]Nagu on näidatud joonisel 5, hõlmavad Cistanche peamised fenüületanoidglükosiidid ehhinakosiid ja verbaskosiid.

22,6% ehhinakosiidi ja 4,5% verbaskosiidi sisaldava Cistanche'i fenüületanoidglükosiidi koguekstrakti (CTE) toime; ehhinakosiid, Ech; ja verbaskosiidi Ver, HaCaT rakkude proliferatsiooni kohta võrreldi seetõttu veelgi.

[0103]Andmed näitasid, et CTE, Ech ja Ver soodustasid HaCaT rakkude proliferatsiooni.

CTE ja Ver avaldasid tugevaimat mõju, mis viitab naharakkude kaitsvale toimele.

Täiendavad mõjud rasvhapete süntaasi aktiivsusele

[0104]Nagu on näidatud joonisel 6, olid mõjud rasvhapete süntaasi aktiivsusele järgmised.

[0105]Andmed näitasid, et positiivne kontroll rhEGF, Ech ja Ver suurendasid oluliselt rasvhapete süntaasi aktiivsust, kusjuures P<0.05P < 0.05P<0.05.

CTE ei suurendanud rasvhapete süntaasi aktiivsust.

 

Rasvhapete sünteesiga seotud geenide ja valkude ekspressioon

[0106]Joonistel 7–9 on näidatud mõju rasvhapete sünteesiga seotud geenide ja valkude ekspressioonile.

[0107]ACC ja FASN on kirjeldatud kui kiirust piiravat ensüümi ja lipiidide anabolismi põhimootorit.

Koos katalüüsivad need pika ahelaga rasvhapete, sealhulgas palmitiinhappe teket, pakkudes olulist toorainet peamiste barjäärilipiidide, näiteks keramiidide, sünteesiks.

N-SMase on lipiidide lagunemise ja stressisignalisatsiooni peamine initsiaator, millel on kahekordne roll.

See aktiveeritakse vigastuse ajal ja hüdrolüüsib sfingomüeliini, tekitades signaalkeramiide, vallandades põletiku ja apoptoosi ning pärssides normaalset lipiidide sünteesi.

Normaalsetes rakkudes on sellel aga reguleeriv roll lipiidide metabolismis.

[0108]Nagu on näidatud joonistel 7–9, näitasid qPCR ja Western blot tulemused, et Ver, nagu ka rhEGF, reguleeris oluliselt ACC, FASN ja N-SMaasi geeni- ja valguekspressiooni P-ga.<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Tulemused näitavad, et Ver reguleerib ACC ja FASN üles, et reguleerida raku lipiidide sünteesi membraani ehitamiseks, energia salvestamiseks või sekretsiooniks.

Samal ajal võib N-SMaasi ülesreguleerimine aktiveerida sfingolipiidide metaboolset tsüklit.

Toodetud keramiidid ei ole ainult stressisignaalid. Normaalsetes füsioloogilistes tingimustes on need olulised eelkäijad ka teiste komplekssete sfingolipiidide, näiteks glükosfingolipiidide sünteesil või membraani dünaamilisel ümberkujundamisel.

Seega suurendab nende kolme geeni ja valgu koordineeritud ülesreguleerimine raku üldist anaboolset aktiivsust ja membraani remodelleerumisvõimet.

 

Täiendavad mõjud hüaluroonhappe sisaldusele

[0109]Nagu on näidatud joonisel 10, näitasid andmed, et rhEGF, CTE, Ech ja Ver suurendasid oluliselt hüaluroonhappe sisaldust, kusjuures P<0.05P < 0.05P<0.05.

Toime järjekord oli CTE, millele järgnes Ver, millele järgnes Ech.

 

Hüaluroonhappe sünteesiga seotud geenide ja valkude ekspressioon

[0110]Nagu on näidatud joonistel 11–13, moodustavad HAS2, HAS3 ja CD44 HaCaT rakkude hüaluroonhappe metabolismis "sünteesi-sensori-vastuse" tagasisideahela.

HAS2 ja HAS3 on peamised katalüütilise sünteesi ensüümid.

HAS2 toodab peamiselt suure molekulmassiga hüaluroonhapet ning seda seostatakse naha homöostaasi säilitamise ja põletikuvastase toimega.

HAS3 kipub tootma madalama molekulmassiga hüaluroonhapet ja osaleb otsesemalt protsessides, sealhulgas rakkude migratsioonis ja proliferatsioonis.

CD44 on hüaluroonhappe peamine rakupinna retseptor.

See mitte ainult ei vahenda rakusisest ja rakuvälist signaaliülekannet, mis hõlmab hüaluroonhapet, vaid reguleerib ka dünaamiliselt hüaluroonhapet endotsütoosi ja ringlussevõtu kaudu ning reguleerib omakorda HAS2 ja HAS3 ekspressiooni ja aktiivsust.

[0111]Nagu on näidatud joonistel 11–13, näitasid qPCR ja Western blot tulemused, et Ver, nagu ka rhEGF, reguleeris oluliselt HAS2, HAS3 ja CD44 geeni- ja valguekspressiooni P-ga.<0.05P < 0.05P<0.05.

Veri regulatiivne mõju HAS2, HAS3 ja CD44 geeniekspressioonile oli suurem kui rhEGF-il.

Tulemused näitavad, et Ver reguleerib HAS2, HAS3 ja CD44, et kontrollida täielikku hüaluroonhappe sünteesi – kokkupanek – signaali edastamise protsessi, aidates kaasa epidermise hüdratatsioonile, parandamisele ja barjäärifunktsioonile.

Mõju Tight-Junction valgu ekspressioonile

[0112]Naha lipiidide ja hüaluroonhappe tootmise säilitamist kirjeldatakse kui HaCaT-rakkude vahelise tiheda ühendusega valkude põhilist, sünergilist tuge ja stabiliseerimist.

Piisavad lipiidid võimaldavad keratinotsüütidel moodustada terviklikke organiseeritud rakkudevahelisi lipiidide kaksikkihte.

Neid struktuure kirjeldatakse mitte ainult barjääri füüsilise raamistikuna, vaid ka stabiilse, hüdrofoobse struktuurse keskkonnana tiheda ühendusega valkude kokkupanekuks ja ankurdamiseks.

Samas aitab hüaluroonhappe poolt säilitatav soodne hüdratatsiooniseisund tagada keratinotsüütide normaalse ainevahetuse ja signaaliülekande.

Retseptoreid, nagu CD44, hõlmavate radade kaudu reguleerib hüaluroonhape kaudselt ka tiheda ühendusega valkude ekspressiooni ja jaotumist.

Lipiidid ja hüaluroonhape koos tagavad füüsikalise ja biokeemilise aluse, mis on vajalik tihedate ühenduste moodustamiseks ja säilitamiseks struktuuri stabiilsuse ja mikrokeskkonna homöostaasi vastavatest aspektidest.

Nad tugevdavad seeläbi füüsilisi rakkudevahelisi ühendusi ja üldist barjääri terviklikkust.

[0113]Eeltoodud tulemused näitasid, et Ver näitas kõige tugevamat aktiivsust naha lipiidide ja hüaluroonhappe tootmise edendamisel.

Selle mõju edasine uurimine rakkudevahelistele tihedatele ühendustele näitas, et CTE, Ech ja Ver soodustasid märkimisväärselt tiheda ühendusega valgu claudiin-1 ekspressiooni koos P-ga.<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

Nagu on näidatud joonisel 15, soodustasid ainult Ech ja Ver märkimisväärselt okludiini ekspressiooni.

Veri mõju oli oluliselt suurem kui Echi oma, kusjuures P<0.05P < 0.05P<0.05.

See oli kooskõlas Verile omistatud tugevaima tegevusega naha lipiidide ja hüaluroonhappe tootmise edendamisel.

 

Mõju haavade paranemisele

[0114]Nagu on näidatud joonistel 16–17, osaleb HAS3 otseselt protsessides, sealhulgas rakkude migratsioonis ja proliferatsioonis.

CD44 edastab teavet hüaluroonhappest rakkudesse ja reguleerib lõpuks rakkude migratsiooni, proliferatsiooni ja hüdratatsiooni, mängides keskset rolli haavade paranemisel, naha niisutamisel ja barjääri homöostaasis.

Eelnevad katsed näitasid, et verbaskosiid soodustas oluliselt HAS3 ja CD44 ekspressiooni.

Seetõttu uuriti edasi selle võimet soodustada haavade paranemist.

[0115]Nagu on näidatud joonistel 16–17, näitasid tulemused, et CTE, Ech ja Ver soodustasid haavade paranemist.

Kuid ainult Ver näitas 24 tunni jooksul märkimisväärset edendavat toimet.

Sellel oli tugevaim haavade paranemist soodustav toime, mis on kooskõlas HAS3 geeni ja valgu ekspressiooni olulise edendamisega.

Toimetaja kvalifikatsioon: selle tulemuse jaoks pakutav katsemeetod on raku kriimustustest. "Haava paranemine" on allikas kasutatud terminoloogia ja seda ei tohiks siin tõlgendada kui tõestatud kliinilist tulemust.

 

Koostiste niiskust säilitav jõudlus

[0116]Nagu on näidatud joonisel 18, hinnati proovi niiskuse säilitamise võimet niiskuse säilitamise kõverate suundumuste põhjal, et hinnata naha niisutavat toimet.

Andmed näitasid, et proovi 1 niiskusepeetuse kõver oli kõrgem proovi 2 ja positiivse kontrolli omast.

25 kraadise ja 50% suhtelise õhuniiskuse tingimustes oli proovil 1 parem niisutav toime kui proovil 2 ja 5% glütseriini kontrollil, mis näitab tugevaimat niisutavat toimet.

Proov 1 sisaldas Ver ja proov 2 sisaldas Ech.

Allika sõnul näitavad need tulemused, et toodetesse lisatuna on Veril parem homogeensus ja niisutav toime kui Ech, nagu on kokku võetud tabelis 2.

[0117]Tabel 2. Erinevate proovide tegevuse kokkuvõte.

Tabeli sisu ei sisaldunud kaasasolevas allikas.

[0118]Märkus: [olulisuse sümbolit lisatud tekstis ei esitatud.] Võrreldes tühja kontrollrühmaga, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Avalikustamises esitatud üldine tõlgendus

[0119]Eeltoodud tulemused näitavad, et verbaskosiidil on suurepärane niisutav toime, aktiveerides täpselt täieliku suletud ahelaga nahabarjääri parandamise mehhanismi.

Esmalt toimib see basaalkihile, et oluliselt kiirendada epidermise rakkude uuenemist ja korrapärast diferentseerumist, pakkudes barjääri ehitamiseks piisavalt rakulisi ehitusplokke.

Seejärel soodustab see keratinotsüütide vaheliste tihedate ühenduste ja desmosomaalsete struktuuride tugevdamist, tugevdades rakkude vahelist füüsilist ankurdamist ning suurendades barjääri tihedust ja mehaanilist tugevust.

Samal ajal aktiveerib see tõhusalt lipiidide metabolismi võtmeensüüme ja täiendab rakkudevahelist lipiidide maatriksit, täites "mördi" ruumid "telliste" vahel, et vältida veekadu.

Lõpuks, hüaluroonhappe süntaasi ekspressiooni ülesreguleerimisega suurendab see samaaegselt hüaluroonhappe sisaldust pärisnahas ja epidermises, püüdes ja säilitades märkimisväärses koguses vett.

See moodustab täieliku funktsionaalse ahela, mis hõlmab uuendamist allika juures, konstruktsiooni tugevdamist, maatriksi täiendamist ja vee säilitamist.

See võib seeläbi saavutada suletud ahela "rakkude proliferatsiooni soodustamine → rakkudevaheliste füüsiliste ühenduste tugevdamine → lipiidide ja hüaluroonhappe tootmise soodustamine → haavade paranemise soodustamine".

Allikas järeldab, et see annab paremaid kasutusefekte kui ehhinakosiid Cistanche'ist ja tavaliselt kasutatav niiskusesäilitaja glütseriin ning seda võib kasutada nahka kaitsva ainena funktsionaalses nahahoolduses ja paiksetes toodetes.

[0120]Eeltoodud kirjeldused on ainult leiutise spetsiifilised teostused.

Leiutise kaitse ulatus ei ole piiratud nende teostustega.

Kõik muudatused või asendused, mida vastava ala asjatundja võib leiutises avalikustatud tehnilises ulatuses hõlpsasti ette kujutada, kuuluvad leiutise kaitse alla.

Vastavalt sellele määratakse leiutise kaitse ulatus kindlaks nõudluspunktides.