Abstraktne:Egiptuse mandariini (Citrus reticulata Blanco, F. Rutaceae) seemnete fütokeemiline uurimine andis kolmteist teadaolevat ühendit, 1–13. Eraldatud ühendite struktuurid määrati 1D ja 2D NMR ja HRESIMS analüüside abil. Nende ühendite farmakoloogilise aktiivsuse iseloomustamiseks rakendati mitmeid integreeritud virtuaalse skriiningupõhiseid ja molekulaarse dünaamika simulatsioonipõhiseid katseid. Selle tulemusena identifitseeriti ühendid 2, 3 ja 5 oletatavasti hüaluronidaasi, ksantiinoksüdaasi ja türosinaasi inhibiitoritena. Järgnev in vitro testimine viidi läbi in silico-põhiste katsete valideerimiseks, et tuua esile nende flavonoidide kui paljulubavate hüaluronidaasi, ksantiinoksüdaasi ja türosinaasi inhibiitorite potentsiaal, mille IC50 väärtused jäid vahemikku 6,39 ± 0,36 kuni 73,7 ± 2,33 µM. . Käesolev uuring heidab valgust Egiptuse mandariini jääkainete (st selle seemnete) potentsiaalile naha tervist edendava loodusliku toimeainena. Lisaks näitas see integreeritud pöörddokipõhise virtuaalse sõelumise ja MDS-põhiste katsete rakendatavust looduslike toodete bioloogilise potentsiaali tõhusal ennustamisel.

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja see suudab eemaldada reaktiivseid hapniku liike ja takistada vabade radikaalide poolt indutseeritud kollageeni lagunemist, samuti on sellel hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Klõpsake valikul Cistanche tablettide eelised

【Lisateabe saamiseks: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Sissejuhatus

Mandariinid, C. reticulata, on ühed kõige tähelepanuväärsemad tsitrusviljad värskelt kasutamiseks [1]. Neid tutvustatakse sageli mandariinidena; 'Mandariin' on aga populaarsem nimi. Looduses on levinud mitmeid mandariiniliikide hübriide ja sorte [1]. Kõige kuulsamad ja keerukamad liigid on C. unshiu Marcovitch, C. nobilis Loureiro, C. deliciosa Tenore ja C. reticulata Blanco [1,2]. Mandariinid on paljudes riikides korjatud tsitrusviljade hulgas. Kuigi neid põllukultuure kasutatakse peamiselt magustoiduks, on neil eeterlike õlide tõttu oluline kaubanduslik tähtsus [3]. Tsitrusviljade maitset kasutatakse jookides, kondiitritoodetes, küpsistes ja magustoitudes [4]. Samuti kasutatakse C. reticulata koort likööri maitsestamiseks [4].

Pöörddokkimine on teatud tüüpi virtuaalne sõelumismeetod, mida saab manipuleerida, et ennustada teatud ühendi struktuuri potentsiaalseid molekulaarseid sihtmärke. Varem oleme kasutanud seda tõhusat virtuaalset sõelumismeetodit, et määrata mitmete isoleeritud looduslike toodete jaoks parimad valgu sihtmärgid [5]. Sellest esialgsest sõelumisetapist saadud dokkimisskoorid annavad siiski vaid mõningast teavet valgu sihtmärkide ja päringuühendi struktuuri vahelise struktuurse komplementaarsuse kohta [6]. Sellest tulenevalt annavad molekulaarse dünaamika simulatsiooni (MDS) katsed, sealhulgas absoluutse sidumisvaba energia (∆Gbinding), rangemad ja usaldusväärsemad tulemused, mida saab valida in vitro testimiseks. Siin allutasime C. reticulata seemnetele astmelise kromatograafilise isoleerimise, et saada aimu peamisest fütokemikaalist selles jäätmes. Seejärel uurisime, kas neil fütokemikaalidel on teatud farmakoloogilised toimed, allutades neile järkjärgulise ränipõhise analüüsi, mis algatati põhjaliku pöörddoki abil ja lõppes mitme MDS-katsega. C. reticulata seemnetest saadud bioaktiivsete fütokemikaalide potentsiaal heidab valgust söödavate puuviljade jääkproduktide suurele mahule tervist edendavate ainete tohutu reservuaarina.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Taimne materjal

C. reticulata viljad koguti 2021. aasta jaanuaris Egiptuse Beni-Suefi kohalikust piirkonnast ja nende autentsust kinnitas vanembotaanik, prof dr Abd El-Halim A. Mohammed taimestiku ja fütotaksonoomia uurimise osakond; Aiandusuuringute Instituut; Dokki; Kairo; Egiptus). Puuviljaproovi hoiti farmakognoosia osakonnas vautšeri numbri 2021-BuPD 80 all; Farmaatsiakool; Beni-Suefi ülikool; Egiptus).

2.2. Kemikaalid ja reaktiivid

Etüülatsetaat (EtOAc), metanool (MeOH), n-heksaan (n-Hex), etanool (EtOH), diklorometaan (DCM) ja n-butanool (n-BuOH) saadi firmalt El-Nasr Company, Egiptus. Sigma Aldrich, Saint Louis, MO, USA, pakkus NMR analüüsi jaoks deutereeritud lahustid, samuti kõrge puhtusastmega lahustid HPLC, spektroskoopiliste ja kromatograafiliste analüüside jaoks (nt metanool-d4 (CD3OD), dimetüülsulfoksiid-d6 (DMSO), kloroform -d (CDCl3), metanool HPLC jaoks, HPLC-puhtus vesi ja HPLC-puhtus atsetonitriil). Kromatograafiliseks isoleerimiseks Sephadex LH20 (0,25–0,1 mm, GE Healthcare, Sigma-Aldrich; CA, USA) ja silikageel (E-Merck, Sigma-Aldrich, CA, USA) kasutati. Vaakumvedelikkromatograafia jaoks kasutati TLC jaoks mõeldud silikageeli (Pharmaceuticals and Chemicals; El-Nasr Company; Kairo, Egiptus) (VLC). TLC uuringutes kasutati eelnevalt kaetud silikageeli (E-Merck, Darmstadt, Saksamaa). Tekkinud laigud tuvastati paraaniisaldehüüdi abil pärast kuumutamist temperatuuril 110 ◦C [7]. Kõik bioloogiliste uuringute materjalid pärinesid ettevõttest Sigma Chemical Company (SCC; CA, USA).

2.3. Spektraalanalüüsid

NMR signaalid saadi 1H-NMR jaoks 400 °C juures ja13C-NMR jaoks 100 MHz juures. Võrdlussignaalidena kasutati CDCl3-d, CD3OD-d4 ja DMSO-d6 lahusti piike. NMR-signaal saadi NMR-seadmega Bruker Advance-III 400 MHz (Bruker AG-Billerica, California, MA, USA).

Kõrge eraldusvõimega massiandmed koguti Acquity-Ultra-Performance-Liquid Chromatography-masina abil, mis oli ühendatud kvadrupool-lennuaja-hübriidmassispektromeetriga (Waters, Milford, MA, USA). HPLC kromatograafilise eraldamise saavutamiseks kasutati Agilent/1260-Infinity-preparative-HPLC.

2.4. C. reticulata seemneekstrakti valmistamine

C. reticulata seemned (1 kilogramm) osteti värskelt ja kuivatati seejärel õhu käes varjus. Seejärel riiviti seemned lihvimismasinaga (Henan, Mandri-Hiina). Seejärel ekstraheeriti pulbriline toode põhjalikult 7 0 protsendilise EtOH-ga (1 l × 5). Saadud vedel ekstrakt kontsentreeriti rootoraurustiga (Buchi-Rotavapor-R-300, ColeParmer, Vernon Hills, IL, USA) vaakumis temperatuuril 45 ◦C, et saada 100 g toorkuivaekstrakti, mis seejärel jaotati, kasutades järjest kasvava polaarsusega lahusteid: n-Hex-DCMEtOAc-n-BuOH. Fraktsioonid I (240 g), II (5,0 g), III (3,0 g) ja IV (6,0 g) saadi eraldatud orgaanilise faasi aurustamisega alandatud rõhul. Kõiki ekstrakte ja fraktsioone hoiti järgnevaks fütokeemiliseks ja biokeemiliseks analüüsiks temperatuuril 4 ◦C.

2.5. C. reticulata seemnete peamiste looduslike saaduste eraldamine 

TLC-silikageelkolonni kasutati fraktsiooni I (20 g) eksponeerimiseks normaalsele VLC-le. Kasutati EtOAc ja n-Hex järjestikust elueerimist (0–100 protsenti, 5 protsenti kasvav). Kolm alamfraktsiooni (I1–I3) saadi identsete fraktsioonide kogumisel ja aurustamisel alandatud rõhul. Teises silikageelikolonnis fraktsioneeriti ulatuslikult subfraktsioon I1 (1,0 g). Kromatograafiline elueerimine viidi läbi n-Hex kuni EtOAc gradientsegude abil (0–10 protsenti, 1 protsenti tõus, igaüks 100 ml), et saada ühend 13. (10 mg).

Alamfraktsiooni I2 (50 mg) kromatografeeriti täiendavalt silikageelil-60 (100 × 1 cm, 20 g). Kromatograafilise protseduuri läbiviimiseks kasutati DCM:MeOH, isokraatset segu (0,5 protsenti, 500 ml), et saada ühendeid 8 (20 mg) ja 9 (15 mg). Alamfraktsioon I3 fraktsioneeriti mõnevõrra silikageelil 60 (100 x 1 cm, 20 g). Elueerimisel kasutati DCM:MeOH, isokraatset segu (0,5 protsenti, 500 ml), et saada ühend 10 (20 mg).

Fraktsiooni II (2,5 g) paljastamiseks kasutati TLC silikageeli kolonni. DCM: proovide elueerimiseks kasutati EtOAc-d (0–100 protsenti, tõus 5 protsenti). Tekkinud heitvesi võeti vastu 250 ml osadena. Saadi identsed fraktsioonid ja redutseeriti alandatud rõhul kaheks alamfraktsiooniks (II1–II2). Teises silikageelikolonnis fraktsioneeriti ulatuslikult subfraktsioon I1 (1,0 g). Ühend 5 elueeriti, kasutades DCM: EtOAc (0–10 protsenti, 1 protsenti tõustes, kumbki 100 ml) (10 mg).

Alamfraktsiooni I2 (50 mg) kromatografeeriti täiendavalt silikageelil 60 (100 x 1 cm, 20 g). Ühendite 11 (20 mg) ja 12 (15 mg) saamiseks rakendati kromatograafilist elueerimist, kasutades DCM-i kuni MeOH-ni (isokraatne elueerimine; 0,5%, 500 ml).

Tavalises VLC-s eraldati fraktsioon IV (6.{1}} g), kasutades silikageeli. DCM: proovide elueerimiseks kasutati EtOAc-d (0–100 protsenti, 5 protsenti tõusmas, igaüks 250 ml). Kromatograafilised heitveed võeti vastu 250 ml kaupa.

Identsed fraktsioonid rühmitati ja redutseeriti alandatud rõhul, et saada viis alamfraktsiooni (IV1–V5); alamfraktsioonid IV1, IV2, IV3 ja IV4 kromatografeeriti vaid vähesel määral Sephadex-LH20 kolonnis, mida elueeriti MeOH-ga, saades 4 (30 mg), 6 (50 mg), 7 (70 mg) ja 1 (15 mg, vastavalt, samas kui alafraktsioon IV5 oli oluliselt puhas (10 mg).

2.6. In Silico uuring

2.6.1. Pöörddokkimine

Eraldatud flavonoidide tõenäolised molekulaarsed sihtmärgid tehti kindlaks, allutades nende struktuuridele virtuaalse sõelumise, sõltuvalt pöörddokist peaaegu kõigi valguandmete pangas välja antud valkude vastu; Esialgne eelarveprojekt.

Selle sammu jaoks kasutati veebipõhist platvormi IdTarget. See virtuaalse struktuuriga tühine sõelumisprogramm kasutab konkreetset pöörddokimise meetodit, nimelt DivideConquer-Docking, mis loob piiratud kattuvaid võrke, muutes valgu uurimise piiratumaks. Selle tulemusena suudab see lühikese aja jooksul teha suure hulga dokkimisi [8]. Saadud hindeid kirjeldati hinnangute loendina, mis ulatus halvimast parimani. Iga konkreetse struktuuri optimaalsete valgu sihtmärkide tuvastamiseks kasutasime piirväärtusena afiinsusskoori –10 kcal / mol (tabel 1).

Molekulaarse dünaamika simulatsiooni (MDS) katsed viidi läbi, nagu on varem teatanud Alhadrami et al. 2021 [6]. MDS-katsete läbiviimiseks kasutati Maestro tarkvara MDS-masinat (st Desmond v. 2.2; Hamburg, Saksamaa) [9–11]. Simulatsioonisõitudeks kasutati OPLS-Force-Field.

Valgustruktuuride ettevalmistamine viidi läbi System-Builder algoritmi abil, milles need pakiti ortorombilisesse veekasti (20 Å3 ), kasutades TIP3P veemudelit koos Na plus ja Cl− ioonidega, {{ 16}}.15 M iga neist. Seejärel tasakaalustati optimeeritud modelleeritud struktuurid esialgselt 10 ns. Ligandi struktuurid parameetristati automaatselt struktuuri ettevalmistamise etapis vastavalt OPLSForce-Fieldile. Metalli sisaldavad valgud, nagu MMP-d, mis hõlmavad histidiin-Zn pluss 2 kompleksi efektiivses kohas, tuleks valgu moodustamise etapis parameetrid määrata. Jätkamiseks tuleks heteroaatomitele, nagu Zn (Generate Hetero States), seadistada hetero olek. See funktsioon on osa maestro valgu moodustumise viisardist. See samm hõlbustab heteroaatomi (st Zn pluss 2) õige heterooleku või koordinaadi kovalentse oleku väljatöötamist valguga võrgus, nii et jõuväljad, nagu OPLS, saaksid tsingi aatomit kiiresti jälgida. Nano-scale Molecular Dynamics tarkvaraga (NAMD 3.0) [12] tehtud reprodutseerimiseks määrati modelleeritud struktuuride topoloogiad ja parameetrid võrguplatvormi Ligand Reader ja Modeler abil. Zn pluss 2 paigal hoidmiseks kasutati harmoonilisi Tcl jõude.

Sidumise vaba energia (∆Gbinding) arvutamine viidi läbi nii, nagu on eelnevalt kirjeldanud Alhadrami et al. 2021 [6]. ∆Lihvimine viidi läbi kasutades vaba energia häirimise (FEP) protseduuri [12], mida kirjeldatakse üksikasjalikult Kim jt väljaandes. Lühidalt, see meetod arvutab vajaliku ligipääsetava energia ∆Gbinding, kasutades võrrandit ∆Gbinding=∆GComplex − ∆GLigand. Iga ∆ jahvatuse väärtus arvutatakse NAMD programmi abil eraldi katsetes.

Kõiki sisendfaile saab ette valmistada veebisaidi CharmmGUI kaudu. Seejärel kasutati faile kavandatud ∆Gbinding arvutuste tegemiseks, kasutades NAMD-s FEP-protokolli. Tasakaalustamine määrati hiljem NPT-s (300 K, 1 atm, Langevin-Piston-Pressure "Complex" - "Ligand") TIP3P veemudeli olemasolul. Hiljem koostati iga struktuuri jaoks 10 ns FEP simulatsioonid ja viimased 5 ns saadaolevatest energiakogustest arvutati valmis vaba energia määrade jaoks [12]. Lõppkokkuvõttes oodati ja hinnati sidumispositsioone VMD programmi [13] abil.

2.7. Hüaluronidaasi aktiivsuse in vitro analüüs

Hüaluronidaasi inhibeeriv toime kujunes välja Chaiyana jt poolt varem kehtestatud korras. 2019 [14]. Hüaluronidaasi aktiivsust inhibeerivat toimet hinnati järgmise võrrandi alusel: hüaluronidaasi inhibeerimine ( protsenti )=(1 − A/B) × 100, kus A ja B on hüaluroonhappe iseloom pärast ravi, kui on olemas või puudub ravi. proov eraldi. Positiivse kontrollina kasutati 6-O-palmitoüüllaskorbiinhapet. Katse viidi läbi kolmes eksemplaris.

2.8. Ksantiini oksüdaasi aktiivsuse in vitro analüüs

Ksantiinoksüdaasi (XO) inhibeerimispotentsiaal viidi läbi vastavalt eelnevalt kirjeldatud meetodile [15]. Vesinikperoksiidi vabanemise tõttu XO oksüdatsiooni käigus tekkivat värvi mõõdeti lainepikkusel 570 nm, kasutades plaadilugejat EPOCH™ "MICROPLATE READER (BIOTEK)". Nelikümmend neli mikroliitrit ksantiini oksüdaasi puhvrit segati 2 µL ksantiini substraadi lahuse ja 2 µL XO-ga. Positiivse kontrollina kasutati L-mimosiini. See katse viidi läbi kolmes eksemplaris.

2.9. Türosinaasi aktiivsuse in vitro analüüs

Iga flavonoidi türosinaasi inhibeerivat aktiivsust täheldati, kasutades DOPAchrome protsessi, mis vastab Momtazi jt skeemile. 2008 [16], mida muudeti Nerya et al. 2003 [17] ja Curto et al. 1999 [18]. Türosinaasi inhibeerivat aktiivsust mõõdeti järgmise võrrandi abil: inhibeeriv aktiivsus (protsent)=(1 − A/B) × 100, (9) kus A ja B on segu neeldumised, mis esinevad testige vastavalt flavonoide. Iga katse viidi läbi kolmes eksemplaris.

3. Tulemused ja arutelu

3.1. C. reticulata seemnete fütokeemiline uurimine

Kasutades UV-, 1H- ja DEPT-Q NMR-i, lisaks võrdlusele kirjandusega ja kasutades mõningaid autentseid proove, on teadaolevad ühendid kaempferool 1 [19], kaempferool-40 -O- -Dglükopüranosiid 2 [19], kaempferool. -7-O- -D-glükopüranosiid 3 [19], 2-hüdroksügenisteiin 4 [19], hesperetiin 5 [19], 3000 (1000-O- - D-glükopüranosüül)-sahharoos 6 [20], 6(1000 -O- -Dfruktofuranoos)-30 (1"-O- -D-glükopüranosüül)-sahharoos 7 [20 ], 1-O-elaidoüülglütserool 8 [21], 1- O-oleoüül-2-palmitoüülglütserool 9 [22], 1-O-oleoüülglütserool 10 [ 21], (E)-3-((4-metüülheptüüloksü)karbonüül)akrüülhape 11 [23], (E)-3-((6-metüülnonüüloksü) karbonüül)akrüülhape 12 [23] ja -sitosterool 13 [24] (joonis 1) tuvastati C. reticulata seemnete tooretanooliekstraktist. Kõik tuvastatud ühendid 11 ja 12 eraldati siin esmakordselt perekonnast Citrus ( Joonised 1 ja S1–S28. Väärib märkimist, et erinevalt laialt levinud flavanoonidest ja flavonoonidest C. reticulata õhust osades, sealhulgas viljades, näisid flavonoolid olevat seemnetes domineeriv flavonoidide tüüp.

3.2. In Silico Investigation

Eraldatud ühendite bioloogilise aktiivsuse iseloomustamiseks tegime neile mitmeid in-silico-põhiseid analüüse. Esiteks keskendusime oma esialgse virtuaalse sõelumisetapi jaoks eraldatud flavonoididele (1–5), kuna flavonoidid on hästi tuntud bioaktiivsed taimede sekundaarsed metaboliidid. Lisaks on ülejäänud isoleeritud ühendid (6–13) tavalised esmased metaboliidid, millel tõenäoliselt puudub terapeutiline efektiivsus.

Flavonoidide 1–5 struktuuridele viidi läbi dokkimispõhine virtuaalne sõelumine peaaegu kõigi esialgses eelarveprojektis sisalduvate valkude suhtes. Selle esialgse virtuaalse sõelumise ülesande jaoks kasutati veebiplatvormi, nimelt idTarget [8]. Taastatud hinded otsiti loendina alates suurimast negatiivsest väärtusest kuni väikseimani. Seadsime lõplikuks afiinsuse skoori –10 kcal/mol, et tuua välja iga isoleeritud flavonoidi head eesmärgid (1–5). Leiti, et mitmed huvitavad molekulaarsed sihtmärgid on tõenäoliselt head sihtmärgid nendele seotud ühenditele, sealhulgas proteiinkinaasid ja süntaasid (tabel 1).

Huvitaval kombel teatati nende flavonoidide, hüaluronidaasi, ksantiinoksüdaasi ja türosinaasi ensüümide vahel kolmest ühisest molekulaarsest sihtmärgist. Need ensüümid on seotud terve naha säilitamisega [25–30] ja seega tuvastati esialgse virtuaalse sõeluuringu käigus need flavonoidid tõenäoliste nahahooldust soodustavate ainetena.

3.3. Molekulaardünaamika simulatsioon ja absoluutse sidumise vabaenergia arvutamine

Esialgse dokkimispõhise sõelumisetapi täiendavaks toetamiseks hindasime ühendite 1–5 absoluutset sidumisvaba energiat (∆Gbinding) hüaluronidaasi, ksantiinoksüdaasi ja türosinaasi ensüümidega, kasutades MDS-sõltuvat meetodit, nimelt vaba energia häirimise meetodit ( FEP) [26,31].

Nagu on näidatud tabelis 2, suutsid ainult ühendid 2, 3 ja 5 saavutada kõrgeima afiinsuse hüaluronidaasi, ksantiini oksüdaasi ja türosinaasi ensüümide suhtes ∆ jahvatusväärtustega vahemikus –8,1 kuni –9,9 kcal/mol. Ülejäänud ühendite ∆G sidumisväärtused olid kõrgemad kui –6 kcal/mol.

Täiendavad 50 ns MDS katsed viidi läbi, et uurida ühendite 2, 3 ja 5 koostoimeid ja seondumisstabiilsust hüaluronidaasi, ksantiinoksüdaasi ja türosinaasi ensüümidega. Nagu on kujutatud joonisel fig 2, saavutasid nii ühend 3 kui ka kokristalliseeritud ligand sarnase seondumisstabiilsuse ensüümi sidumissaidis kogu MDS-i vältel, RMSD-ga ~ 2,8 Å võrreldes algse dokkimispositsiooniga. Ühendi 2 0 RMSD-d olid samuti sarnased ühendi 3 omadega kuni 28,7 ns-ni, mil see hakkab ühendist 3 ja kokristalliseerunud ligandist veidi kõrgemale erinema, et saavutada kogu MDS-i jooksul keskmine RMSD 3,8 Å. Viimane hetktõmmis, mis saadi ühendite 2 ja 3 MDS-ist ja kokristalliseeritud ligandist, näitas, et TYR-75, ASP-129 ja GLU-131 olid tavalised H- kaudu interakteeruvad aminohappejäägid. sidumine.

Seoses ksantiinoksüdaasiga saavutas ühend 3 stabiilse seondumise oma aktiivse saidi sees kogu MDS-i vältel, registreerides keskmiseks RMSD-ks 2,6 Å, mis oli konvergentne kokristaliseeritud inhibiitori omaga (RMSD ~ 2,4 Å). Ühendi 3 stabiilne seondumine oli ilmselgelt tingitud H-sidemete võrgust, mille see lõi LYS-771, PHE-798, GLU-802, SER-876, ARG{{ 12}}, PHE-911, ARG-912 ja THR-1010 (joonis 3).

Lõpuks oli ühend 5 stabiilne ka türosinaasi aktiivse saidi sees kogu 50 ns MDS-i keskmise RMSD väärtusega 4, 9 Å, mis oli kõrgem kui kokristaliseeritud inhibiitoril (RMSD ~ 3, 8 Å). Nagu on näidatud viimases MDS-st tuletatud hetktõmmises, suutis ühend 5 suhelda kahe Zn2 pluss iooniga sarnaselt kokristaliseeritud inhibiitoriga. Lisaks stabiliseeriti see mitme H-sidemega LYS-198, GLY-209, TYR-362, ARG-374 ja THR-391 abil (joonis 4 ).

【Lisateabe saamiseks: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】