Kas saunad on kasulikud või kahjulikud autosomaalse domineeriva polütsüstilise neeruhaiguse korral? Eksam mudelhiirega

Abstraktne taust: 

Kuumašokivalgud (Hsps), mille ekspressioon on indutseeritud termilise töötlemisega, toimivad neerude kaitsmiselapoptoosi pärssiminejaneerutuubulite elujõulisuse säilitamine. Veelgi enam, hiljuti on näidatud, et Hsps ekspressioon võib olla autosomaalse terapeutiline sihtmärkdomineerivpolütsüstiline neeruhaigus(ADPKD). Uurisime kuivsaunateraapia mõjuADPKDmudelhiired.

25% EHHINAKOSIIDI JA 9% AKTEOSIIDI NEERUTUNGIMISEKS LOODUSLIKU ORGAANILISE TASTANHEKSTRAKTI SAAMISEKS KLIKI SIIA

E-post:Wallence.Suen@Wecistanche.Com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Lisateabe saamiseks ostke:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Meetodid ja tulemused:

Hiired (isased DBA/2FG-tasulised hiired) jaotati kolme rühma: kontrollrühmad, TS: pcy hiired, kellele manustati 4% sahharoosi sisaldavat vett, SW: pcy hiired, kellele manustati 4% sahharoosi sisaldavat vett. TS rühmas käidi nelja nädala jooksul kaks korda nädalas saunas. TS-rühmas saavutati rektaalne temperatuur ligikaudu 390 kraadi juures ja seda hoiti selle juures, kuni nad eemaldati ettevaatlikult kaug-infrapunakiirguse seadmest. Pärast 4-nädalast saunaravi määrati ensümaatilisel meetodil kreatiniini ja vere-uurea-lämmastiku (BUN) tase. Kuumašoki valku (HSP) või rakkude kasvu ja suurusega seotud valke analüüsiti Western blot analüüsiga. TS-rühma kreatiniini- ja BUN-tasemed olid pisut kõrgemad kui kontroll- ja SW-rühmad, kuid erinevused ei olnud olulised. Kuid tsüstide suurenemine TS-rühmas vähenes oluliselt võrreldes kontrollrühmaga. HSP90 ekspressioon oli TS ja SW rühmades kontrollrühmaga võrreldes veidi langenud (p < 0.01 või p < 0,001, vs kontroll), nagu ka Erki ekspressioon. , mis on seotud tsüstide arengu ja proliferatsiooniga (p < 0,05, TS vs kontroll). Hsp27 ekspressioon ja fosforüülimise tase SW rühmas olid võrreldavad kontrollrühma omaga. TS-rühmal oli aga suurenenud Hsp27 ja fosforüülimise (NS) tase. Prokaspaasi -3 ekspressioon TS-rühmas oli veidi madalam kui kontrollrühmas. Kaspaasi-3 aktiivsus kõigis rühmades ei näidanud aga erinevusi.

Järeldus: Selle uuringu tulemused näitasid, et 4-nädalane saunaravi võib põhjustada mööduvat dehüdratsiooni ja sellega seotud neerufunktsiooni häireid ning põhjustada tsüstide kasvu stimuleerimise riski suurenenud Hsp27 ekspressiooni tõttu. Lisaks jõudsime järeldusele, et dehüdratsiooni ja tsüstide kasvu saab ära hoida, kui võtta kohe pärast saunaprotseduuri sobiv kogus vett.

Märksõnad:autosoomne domineeriv polütsüstilineneeruhaigus, saun, veevõtt, Hsp90, Hsp27

I Sissejuhatus

Autosoomne domineerivpolütsüstiline neeruhaigus(ADPKD) on geneetiline haigus, mida iseloomustab arvukate tsüstide kasv mõlemas neerus. ADPKD-d põhjustavad peamiselt mutatsioonidpolütsüstiline neeruhaigus1 (PKD1) ja PKD2 geenid, mis kodeerivad vastavalt polütsüstiini 1 (PC1) ja PC2. Aastakümneid kestnud haiguse käigus tekivad patsientidel suured vedelikuga täidetud neerutsüstid, mis kahjustavad neerufunktsiooni. Praegu on ADPKD-ga patsientide arv Jaapanis hinnanguliselt 31,000, mis moodustab ligikaudu 3-5% kõigist dialüüsipatsientidest). Ligikaudu 50% ADPKD-ga patsientidest tekib 602. eluaastaks lõppstaadiumis neeruhaigus). Tolvaptaan, vasopressiini retseptori 2 (V2) antagonist, kiideti heaks esimese ADPKD raviainena ja selle kliiniline kasutamine algas 2014. aasta mais Jaapanis. Kuigi tegemist on tõhusa ravimiga, mis vähendab tsüstide kasvu, ei ole praegu ADPKD-d ravitav ning tsüstide teket neerudes ei ole võimalik peatada.

Termoteraapia, sealhulgasbalneoteraapia(BT) jaspaateraapia(ST) on ülemaailmselt sageli kasutatud füsioteraapia või alternatiivse ravina. Kliinilistes tingimustes on termoteraapia peamine eesmärk saavutada tõhusad ravitulemused normaalseid kudesid kahjustamata. Hiljutine süstemaatiline ülevaade näitas, et BT ja ST tagavad lihas-skeleti süsteemi või sidekoe krooniliste haiguste korral märkimisväärse valu leevendamise ja parema elukvaliteedi). Termiline stimulatsioon indutseerib kuumašoki valke (Hsps), mis on rakkude ellujäämiseks olulised tänu nende funktsioonile valgu chaperonidena. Hsps roll neerude tervises ja haigustes on erinev. Hsps-i indutseerimine võib sõltuvalt konkreetsest Hsps-st, rakutüübist ja kontekstist olla neerudele kasulik või kahjulik). Neerukudes on Hsps rakusisese kaitsesüsteemi oluline osa, mida aktiveerib erinevat tüüpi rakuline stress. Erinevad rakus olevad Hsps-d stabiliseerivad rakustruktuure ja suurendavad rakkude resistentsust apoptoosi ja nekroosi suhtes6), 7). Viimastel aastatel on teatatud, et Hsps-d mängivad ADPKD-s kahjulikku rolli ja on seetõttu terapeutilised sihtmärgid8), 9). Seetõttu oli eesmärgiks uurida saunade mõju ADPKD mudelloomadele, kui kordub soojuskoormus, mis tõstab rektaalset temperatuuri ligikaudu 2 kraadi ja hoiab seda ligikaudu 30 minutit.

II Materjalid ja meetodid

1. Autosoomne dominantne polütsüstilise neeruhaiguse (ADPKD) mudelhiir Kõik loomkatsed viidi läbi vastavalt laboriloomade hooldamise ja kasutamise juhistele, mille on heaks kiitnud Kumamoto terviseteaduste ülikool (nr 18-07). Kasutati isaseid DBA/2FG-pcy (pcy) hiiri10), 11) (8 nädalat vana, n=12) (Kyudo, Kumamoto, Jaapan), algse kehamassiga 20,9±0,7 g. ADPKD mudelhiired selles katses. ADPKD hiiremudeli võrdlusena kasutati isaseid DBA hiiri (8 nädalat, n=3). Joonisel 1 on kujutatud pcy hiirte tüüpiliste näidetena välimus ja väljalõigatud neer (joonis 1A, B). Kõiki loomi hoiti kontrollitud niiskuse ja temperatuuri all 12:12-h valguse/pimeduse tsükliga ning neile anti vaba juurdepääs tavalisele hiiretoidule ja kraaniveele.

Üheksa pcy hiirt (8 nädala vanused) jagati juhuslikult järgmisse kolme rühma – kontrollrühm: pcy hiired kontrollrühmana (n=3), TS rühm: pcy hiired, keda eksponeeriti korduvale süsteemsele termilisele stimulatsioonile (n {{3} }); ja SW rühm: pcy hiired, kellele anti 4% sahharoosi sisaldavat vett (n=3). TS-rühma hiirtele anti üle öö vett, mis sisaldas 4% sahharoosi, pärast süsteemset termilist stimulatsiooni, et vältida dehüdratsiooni. Eelmises uuringus leidsime, et kehamassi langus oli pärast süsteemset termilist stimulatsiooni umbes 3–4%12). Kui pcy hiirtele anti 4% sahharoosivett, suurenes tarbitud vee kogus oluliselt 5,6 ± 0,6 ml-lt 7,4 ± 0,7 ml-ni (p < 0,001). , joonis 1C). Üleöö 4% sahharoosi vee tarbimine oli tõepoolest suur vedeliku tarbimine, mis võrdub 14 ± 7% kehamassist. SW rühm tarbis vett üleöö samal sagedusel kui TS rühm.

2. Süsteemne termiline stimulatsioon (saun)

Sauna kuumuse intensiivsus määrati eelmises uuringus13). Mõnede pcy hiirte rektaalne temperatuur ületas siiski 42 kraadi nende väikese kehamahu tõttu võrreldes tavaliste DBA hiirte ja 129X1 / SvJ hiirtega. Seetõttu üritati tõsta rektaalset temperatuuri 1 kraadi võrra, kuid kaug-infrapunakiirgusega kuivsaunasüsteemi juhtimise piiratuse tõttu (pakkus Kagoshima ülikool) määrati rektaalne temperatuur tõusma ligikaudu 39 kraadini. ADPKD esinemise sageduse kohta teateid ei leitud; Seetõttu võeti kasutusele minimaalne efektiivne saunatamissagedus (kaks korda nädalas), mis kehtestati Laukkaneni jt.14) saunaskäimise ja südame-veresoonkonna haiguste ning muude suremuse põhjuste vahelise seose kohta. Täpsemalt, hiired said saunaprotseduuri 43 kraadi juures kümme minutit ja seejärel 37 kraadi juures 35 minutit, et tõsta rektaalset temperatuuri 37,1 ± 0,1 kraadilt 39,3 ± 0,3 kraadini, kasutades infrapunakiirte kuivsauna süsteem. Hiirte rektaalset temperatuuri hoiti umbes 39.{20}} kraadi juures, kuni nad saunaseadmest välja võeti. TS grupp käis saunas neli nädalat, kaks korda nädalas.

3. Analüütiline protseduur

Kõigilt hiirtelt saadi füsioloogilised andmed neljanädalase uuringuperioodi lõpus. Metaboolsetesse puuridesse koguti 24-tunnised uriiniproovid ja määrati vedeliku tarbimine. Vereproovid koguti alumisest õõnesveenist ning plasma kreatiniini ja vere uurea lämmastiku (BUN) taset mõõdeti Hitachi 7180 Biochemistry Automatic Analyzer (Hitachi High-Technologies Corporation, Tokyo, Jaapan) abil koos Aqua-auto Kainos CRE-ga. -II testkomplekt või UN-II testkomplekt (Kainos, Tokyo, Jaapan) ensümaatilisel meetodil.

4. Histoloogilised uuringud

Neerud fikseeriti 4% paraformaldehüüdfosfaatpuhverlahusega ja sisestati parafiini. Neeruproovid lõigati 2-µm intervalliga ja värviti hematoksüliini ja eosiiniga (H&E) ning tuubulite tsüstid kvantifitseeriti 2 lõigul hiire kohta (parem neer), kasutades programmi ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA). Nagu varem teatatud, jäeti analüüsist välja kudede pisarate ja mullidega alad, mis tuvastati suurema suurendusega (× 40).

5. Western blot meetod

Naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforees (SDS-PAGE) ja blot viidi läbi standardsete protseduuride abil. Alikvoodid, mis sisaldasid 15 ug valku, allutati SDS-PAGE-le. Kasutati järgmiste valkude vastu tekitatud antikehi: Hsp27 (1:1,000, sc-9012, Santa Cruz Biotechnology), phosphoHsp27 (1:1,000, #2401S, Cell Signaling Tehnoloogia), kogu-Akt (1:1,000, #9272, rakusignaalitehnoloogia), fosfo-Akt (1:1,000, #9275, rakusignaalitehnoloogia), Erk1/2 (1:1,000, #9102, rakusignaalitehnoloogia), fosfo-Erk1/2 (1:1,000, #9101, rakusignaalitehnoloogia), mTOR (1:1,{ {39}}, #2972, Cell Signaling Technology), phospho-mTOR (1:1,000, #2971, Cell Signaling Technology), kaspaas 3 (1:500, ab4051, Abcam, Cambridge, UK) , lõhustatud kaspaas-3 (1:1,000, #9661, Cell Signaling Technology) ja -aktiin (1:1,000, sc-130656, Santa Cruz Biotehnoloogia). Blotid tuvastati, kasutades ECL Prime Western blot tuvastussüsteemi (GE Healthcare, UK) vastavalt tootja juhistele. Andmed näitasid suhtelist kvantifitseerimist -aktiini suhtes, mida kasutati sisekontrollina.

6. Statistiline analüüs

Statistilise analüüsi jaoks võrreldi TS ja SW rühmade andmeid Mann-Whitney U testi abil. Rühmad võrreldi ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnes erinevuste tuvastamiseks Tukey testi. Erinevusi peeti statistiliselt olulisteks p < 0,05. Andmed on väljendatud kui keskmine ± standardhälve (SD) või keskmine ± keskmise standardviga (SEM). Statistiliseks analüüsiks kasutati GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA).