Lactobacillus Plantarum NJAU{0}} antioksüdantne aktiivsus vananemise loommudelis

Palun võtke ühendustoscar.xiao@wecistanche.comrohkem informatsiooni

Abstraktne

Taust:Liigne reaktiivsed hapniku liigid (ROS) võivad põhjustada tõsiseid kahjustusi inimkehale ja põhjustada mitmesuguseid kroonilisi haigusi. Uuringud on leidnud, et piimhappebakteritel (LAB) on antioksüdantne ja vananemisvastane toime ning need on olulised ressursid mikroobsete antioksüdantide arendamiseks. Selle artikli eesmärk oli uurida traditsioonilisest kuivsoolatud lihatootest Jinhua Ham sõelutud antioksüdantse tüve Lactobacillus plantarum NJAU-01 potentsiaalset rolli D-galaktoosist põhjustatud hiirte alaägeda vananemise reguleerimisel. Kokku 48 spetsiifilist patogeenivaba Kun Ming hiirt (SPF KM hiired) jaotati juhuslikult 6 rühma: kontrollrühm steriilse soolalahuse süstimisega, vananemisrühm D-galaktoosi subkutaanse süstimisega, ravirühmad D-galaktoosi süstimisega ja maosisene manustamine 10', 10 kraadi ja 10 kraadi FU/mL L.plantarum NJAU-01 ning positiivne kontrollrühm D-galaktoosi süstimise ja 1 mg/ml C-vitamiini intragastraalse manustamisega.

Tulemused:Tulemused näitasid, et ravirühm L. plantarum NJAU-01 näitas 10-kraadise FU/ml juures kõrgemat antioksüdantide koguvõimsust (T-AOC) ja superoksiidi dismutaasi (SOD), glutatioonperoksidaasi (GSH-Px) ja katalaasi (CAT) antioksüdantset ensümaatilist aktiivsust kui neil. seerumis, südames ja maksas. Seevastu oksüdatiivse stressi markeri malondialdehüüdi (MDA) sisaldus oli madalam kui teistes rühmades (P<0.05). the="" antioxidant="" capacity="" was="" improved="" with="" the="" supplement="" of="" the="" increasing="" concentration="" of="" l.="" plantarum="">

Lisateabe saamiseks klõpsake siin

Järeldused:Seega näitab see uuring, et L plantarum NJAU-01 võib leevendada oksüdatiivset stressi, suurendades oksüdatsiooniresistentsuses osalevate ensüümide aktiivsust ja vähendades hiirte lipiidide oksüdatsiooni taset. Märksõnad: Lactobacillus Plantarum NJAU-01, Jinhua Halm, D-galaktoosist põhjustatud vananev loom, malondialdehüüd, antioksüdant

Taust

Oksüdatsioon on protsess, mis on tingimata vajalik rakkude ainevahetuseks kehas. Oksüdatsiooni eest vastutasid reaktiivsed hapnikuliigid (ROS) kui endogeense oksüdatsiooni-redutseerimise (REDOX) reaktsioonides tekkinud vabad radikaalid. Kui aga rakud saavad oksüdatiivsest stressist põhjustatud väliseid stiimuleid, ületab ROS-i liigne tootmine raku ROS-i eemaldamise võime [1]. Mõned uuringuandmed on näidanud, et oksüdatiivne stress on seotud organismide elueaga. südamehaigused, kõrge vere lipiidide tase, artriit, neurodegeneratiivsed haigused, südame- ja tserebrovaskulaarsed haigused [3]. Tavaliselt on kehal rida ensüüme või mitteensüüme ja parandussüsteeme, mis osalevad antioksüdantide kaitses ja kaitsevad neid oksüdatiivsete kahjustuste eest [4-6]. Näiteks askorbiinhape tarbib hapnikku iseoksüdatsiooni kaudu, redutseerides metalliioone, et vähendada oksüdatsiooni-redutseerimise potentsiaali ja osaledes antioksüdantide kaitses [7]. Superoksiiddismutaas (SOD) on võimeline muutma kahjulikud superoksiidi radikaalid vesinikperoksiidiks [8]. Katalaas (CAT) osaleb raku antioksüdantide kaitses, lagundades vesinikperoksiidi, takistades seeläbi Fentoni reaktsioonil hüdroksüülvabu radikaale tekitamast [9]. Kuid üleliigne ROS põhjustaks oksüdatiivseid kahjustusi, mida põhjustavad paljud tegurid, nagu kiiritus (röntgenikiirgus, y-kiirgus, ultraviolett), keemilised reagendid (metalliioonid, HONO, HOCl ja HOBr), ravimid ja nende metaboliidid ja isegi suitsetamine. Need kehas olevad looduslikud antioksüdantide süsteemid on sageli ebapiisavad oksüdatiivsete kahjustuste vältimiseks, mistõttu on vaja antioksüdante, nagu astaksantiin ja foolhape [10]. Seega on olemasoleva lähenemisviisi otsimine, mis võib leevendada või pärssida raku oksüdatiivseid kahjustusi, pälvinud märkimisväärset tähelepanu.

Piimhappebaktereid (LAB) on fermenteeritud lihatoodetes laialdaselt leitud ja kasutatud. Lisaks kääritatud toidu toitainete, maitse ja säilivuse parandamisele on LAB-l ka täiendavad probiootilised omadused [11, 12]. Mõned uuringud on leidnud, et LAB-l on antioksüdantne ja vananemisvastane toime ning need on olulised ressursid mikroobsete antioksüdantide väljatöötamiseks [13]. Näiteks leiti, et Hiina kodus valmistatud liköörist eraldatud Lactobacilluse juhtum leevendab tõhusalt lipiidide peroksüdatsiooni ja parandab lipiidide metabolismi tänu kõrgele kolesterooli eemaldamisvõimele ja inimese soolestiku rakkude adhesioonivõimele [14]. Oleme eelnevalt isoleerinud ja skriininud Jinhua singist kogu antioksüdantse mahu järgi piimhappebakterit ning tuvastanud selle kui Lactobacillus plantarum, tuvastades biokeemilised omadused, koloniaalse morfoloogia ja 16 s rDNA sekveneerimise, nimega L. plantarum NJAU{10} } [15]. L. plantarum NJAU-01 näitas suurepärast DPPH vabade radikaalide, hüdroksüüli vabade radikaalide ja superoksiidi anioonide vabade radikaalide eemaldamis- ja redutseerimisvõimet in vitro [16]. Elektrokeemilise anduriga ühendatud rakumudelis suurendas makrofaagi RAW264.7 võimet reageerida oksüdatiivsele stressile märkimisväärselt inkubeerimisel koos L. plan-tarum NJAU-01 [15].Cistanche ekstrakti kiirgusvastane toimeLisaks L. plantarum NJAU{0}} võib samuti leevendada kääritatud vorsti valgu oksüdatsiooniastet [17]. Seega, L. plantarum NJAU-01 omab in vitro antioksüdantset toimet, mida on paljutõotav kasutada oksüdatiivse stressi reguleerimisel in vivo.

Cistanche on vananemisvastane toime

Seetõttu on oluline hinnata L. Plantarum NJAU{0}} antioksüdantset toimet in vivo, kasutades loommudelit, mis võimaldab tõhusalt jälgida imendumist, transportimist ja ainevahetust loomadel. D-galaktoosi poolt indutseeritud vananemishiired on välja töötatud selleks, et simuleerida oksüdatiivsete kahjustuste esinemist keha vananemisprotsessis aastakümnete jooksul [18]. D-galaktoos aitab kaasa ROS-i tekkele reaktsiooni kaudu aminohapetega, moodustades mitteensümaatilise glükatsiooni kaudu glükatsiooni lõppprodukte, mille eeliseks on madal toksilisus, aeglane oksüdatsiooniprotsess ja surmav toime [19, 20]. Sageli on teatatud, et D-galaktoosi indutseeritud vananemise hiirte mudel hindab probiootikumide, nagu L-karnitiin, ursoolhape ja L. Plantarum AR501, antioksüdantset võimet [19,21,22]. Seetõttu kasutati neid küpseid D-galaktoosist põhjustatud vananevaid hiiri L. plantarum NJAU-01 rolli esialgseks uurimiseks oksüdatiivse stressi leevendamisel hiirtel. L. plan-tarum NJAU-01 söödeti D-galaktoosi poolt indutseeritud vananevatele hiirtele, et hinnata selle in vivo antioksüdantset toimet, mõõtes kogu antioksüdantide võimet (T-AOC), SOD ja glutatiooni antioksüdantset ensümaatilist aktiivsust. peroksidaas (GSH-Px) ja CAT, samuti oksüdatiivse stressimarkeri malondialdehüüdi (MDA) sisaldus hiirte seerumis, südames ja maksas.cistanche herbaSee loob aluse edasistele uuringutele L. plantarum NJAU{0}} arendamise ja kasutamise kohta probiootikumina.

Tulemused

Kehakaal ja elundiindeksid hiirtel

Ükski loom ei surnud söötmisperioodil ja kaasati kõigi hiirte kuupäev. Erinevate L. plantarum NJAU-01 ravide mõju hiirte elunditähtedele on näidatud tabelis 1. D-galaktoosi süstitud vananemisrühma hiirtel oli teiste omadega võrreldes oluliselt väiksem kehakaal. rühmad (P<0.05). no="" significant="" difference="" was="" ob-served="" in="" kidney="" liver="" index="" and="" lung="" be-tween="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" treatment="" groups="" normal="" positive="" group="" aging="" model="" p="">0.05). Vananemismudelite rühma südameindeks oli normaalse rühma omaga võrreldes oluliselt kõrgem (P<>

Hiirte seerumi, südame ja maksa T-AOC aktiivsus Hiirte T-AOC aktiivsus erinevates ravirühmades on näidatud joonisel 1. Vananevate hiirte mudelrühma T-AOC aktiivsus oli 6,68 U/mL ja samal ajal südames, seerumis ja maksas olid vastavalt 6,62, 3,55 ja 3,58 U/mg valku, mis olid madalamad kui teistes rühmades (P<0.05). in="" the="" l.="" plantarum="" njau-01="" lp3="" group,="" serum,="" heart,="" and="" liver="" had="" significantly="" higher="" t-aoc="" than="" the="" other="" groups=""><0.05). the="" liver="" t-aoc="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). however,="" the="" antioxidant="" activity="" of="" the="" heart="" and="" liver="" of="" the="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" lp3="" group=""><0.05). the="" above="" results="" indicate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" t-aoc="" of="" the="" mice="" in="" a="" dose-dependent="">

SOD aktiivsus hiirte seerumis, südames ja maksas

Vananemismudeli rühma hiirte SOD aktiivsus hiirte seerumis, südames ja maksas olid vastavalt 16,72 U/mL, 18,93 U/mg valku ja 44,82 U/mg valku, mis olid oluliselt madalamad kui kontrollrühmal (P<0.05,fig.2).in contrast,the="" sod="" activity="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice="" in="" vc="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" aging="" model="" group="" and="" control="" group=""><0.05). the="" sod="" activity="" in="" heart="" of="" mice="" lp2="" group="" was="" 61.85="" mg="" which="" not="" significantly="" different="" from="" that="" positive="" control="" p="">0.05). Teisest küljest olid SOD aktiivsused suurte annuste rühmas seerumis, südames ja maksas vastavalt 48,83 U/mL, 74,67 U/mg valku ja 69,55 U/mg valku, mis olid oluliselt kõrgemad kui teistes rühmades (P<0.05). these="" results="" showed="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" could="" alleviate="" the="" oxidative="" damage="" induced="" by="" d-galactose="" to="" the="" body,="" and="" increase="" sod="">

GSH-Px hiirte seerumis, südames ja maksas

LP3 rühmal oli kõrgem GSH-PX aktiivsus kui teiste rühmade hiirtel seerumis, südames ja maksas (P<0.05, fig.="" 3).="" the="" gsh-px="" activity="" in="" the="" heart="" and="" liver="" tissues="" of="" mice="" in="" the="" positive="" control="" group="" was="" signifi-cantly="" higher="" than="" that="" of="" mice="" in="" the="" control="" group="" and="" the="" aging="" model="" group=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" for="" the="" serum="" gsh-px="" activity="" between="" lp1="" and="" control="" group="" p="">0.05).Lisaks olid hiirte südame ja maksa vananemise mudelirühmad vastavalt 50,39 U/mL, 8,48 U/mg valku ja 62,67 U/mg valku, mis näitasid madalamat GSH-Px aktiivsust kui teised rühmad (P<0.05). therefore,l.="" plantarum="" njau-01="" has="" an="" enhancing="" effect="" on="" the="" antioxidant="" enzymatic="" activity="" of="" gsh-px="" in="" mice,="" and="" the="" strain="" concentration="" is="" related="" to="" the="" antioxidant="">

CAT aktiivsus hiirte seerumis, südames ja maksas

Nagu on näidatud joonisel 4, olid LP3 hiirte seerumi, südame ja maksa CAT aktiivsused vastavalt 22,98 U/mL, 137,99 U/mg valku ja 136,31 U/mg valku, millel oli kõrgem CAT aktiivsus kui muu ravi korral. rühmad (P<0.05), indicating="" that="" the="" concentration="" of="" the="" strain="" had="" a="" marked="" effect="" on="" the="" cat="" activity.="">cistanche peenise kasvSeevastu vananemismudeli rühm näitas hiirte seerumis, südames ja maksas madalamat CAT-i aktiivsust kui teiste rühmade hiirtel (P<0.05). as="" for="" vc="" group,="" it="" presented="" higher="" cat="" activity="" than="" the="" control="" group="" and="" aging="" model="" group="" in="" serum,="" heart="" and="" liver="" of="" mice=""><0.05). these="" findings="" demonstrate="" that="" l.="" plantarum="" njau-01="" can="" enhance="" the="" cat="" activity="" in="" mice="" serum,="" heart="" and="" liver="">

MDA sisaldus hiirte seerumis, südames ja maksas

Vananemismudeli rühma hiirte MDA sisaldus seerumis, südames ja maksas oli oluliselt kõrgem kui kontrollrühmas (P<0.05, fig.="" 5).="" the="" serum="" mda="" content="" of="" mice="" in="" the="" lp3="" group="" was="" 14.29="" nmol/ml,="" and="" the="" mda="" contents="" in="" the="" heart="" and="" liver="" were="" 8.00="" and="" 26.49="" nmol/mg="" protein,="" respectively,="" being="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" other="" groups=""><0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" in="" mda="" content="" among="" the="" positive="" control="" lp1="" and="" lp2="" groups="" p="">0.05).

Arutelu

Subakuutsete vananevate hiirte mudelit D-galaktoosi induktsiooni abil kasutatakse laialdaselt ja see on hästi tunnustatud [14, 23, 24]. Mudel hõlmab D-galaktoosi pidevat süstimist, mis redutseeritakse rakkudes galaktoosi reduktaasi toimel galaktoosiks, mille tulemuseks on osmootse rõhu muutumine raku ja keskkonna vahel ning seejärel rakkude turse ja vananemine [25]. Oksüdatiivset stressi leevendavad rakusisesed ensüümid, nagu SOD, CAT ja GSH-Px, ei ole piisavad reaktiivsete hapnikuliikide kõrvaldamiseks, kui keharakud on allutatud ägedale oksüdatiivsele stressile. See on otsene ja tõhus meetod LAB-i antioksüdantse aktiivsuse uurimiseks, süstides LAB-d D-galaktoosist põhjustatud alaägeda vananemise hiirtele ja võrreldes ensümaatilist antioksüdantset aktiivsust, nagu SOD, GSH-Px ja CAT kontrollrühmaga [21].

Selles uuringus võrreldi vananemismudeli rühma ja positiivse kontrolli (süst Vc-ga) rühma L. plantarum NJAU-01 ravirühma erinevate annustega. Elundi indeks on katselooma organi massi ja tema kehakaalu suhe ning elundi koefitsiendi suurenemine näitab organi ülekoormust, turset või hüperplaasiat, elundikoefitsiendi vähenemine aga elundi atroofiat ja muid degeneratiivseid. muudatusi. Elundiindeksit kasutati ka vananemisastme muutuste väljendamiseks, nagu on tõestanud Yu jt uuringud. (2016) ja Xu jt. (2016)[18,26]. Käesolev uuring näitas, et vananemise mudelirühma hiirtel oli madalam kaal ja kõrgem südameindeks kui teiste rühmade hiirtel. D-galaktoosi manustamine vähendas oluliselt antioksüdantide ensümaatilist aktiivsust vananemismudeli rühma hiirte seerumis, südames ja maksas. Soovitati, et L. plantarum NJAU{7}} toidulisandid vähendaksid D-galaktoosist põhjustatud oksüdatiivse stressiga hiirte maksakahjustusi, reguleerides SOD, GSH-Px ja CAT ebanormaalset aktiivsust normaalsele tasemele. See on kooskõlas teatatud uuringutega, milles uuriti sihttüvede, sealhulgas L. plantarum AR113 ja ARS01, antioksüdantset rolli [12], L. del-brueckii subsp. bulgaricus F17 [27]. Seega on D-galaktoosi alaägeda hiirte vananemise mudel praeguses uuringus tõhus, et pakkuda konfidentsiaalseid tõendeid LAB antioksüdantse võime uurimiseks in vivo.

Varasemad uuringutulemused on näidanud, et LAB antioksüdantne mehhanism avaldub peamiselt järgmistes aspektides: kelaaditud metalliioonid, autotroofsed antioksüdantide ensüümsüsteemid, antioksüdantsete metaboliitide tootmine, peremeesorganismi antioksüdantsete ensüümide aktiivsuse suurenemine, antioksüdantide signaaliradade kontroll. ja soolebakterite rühma reguleerimine [28]. Need aspektid mängivad olulist rolli oksüdatiivse stressiga seotud haiguste leevendamisel [29]. MDA-d peetakse lipiidide peroksüdatsiooni biomarkeriks ja see võib viia makromolekulide ristseotud polümerisatsioonini, mängides potentsiaalset rolli tsütotoksilisuses ja genotoksilisuses. MDA sisaldust kasutatakse tavaliselt lipiidide peroksüdatsiooni astme hindamise ja rakkude kahjustuse taseme hindamise alusena [30].cistanche salsa eelisedPraeguses uuringus leiti, et D-galaktoosist põhjustatud oksüdatiivse stressiga hiirtel oli L. plantarum NJAU-01 süstimisel oluliselt vähenenud MDA tase seerumis, südames ja maksas, mis näitab, et L. Plantarum võib tõhusalt vähendada lipiidperoksiid hiirtel. See on kooskõlas in vitro uuringuga, mis näitas L. plantarum NJAU-01 tüve tõhusat vabade radikaalide püüdmise võimet [16]. Samamoodi oli L. plantarum ZLP001 söödetud võõrutatud põrsaste seerumi MDA sisaldus madalam (4,1 nmol/ml) kui kontrollrühmal (6,23 nmol/ml), mis näitab, et L. Plantarum ZLP001 omas antioksüdantset toimet [31]. Praegune uuring näitas, et L. plantarum NJAU-01 toidulisandid võivad D-galaktoosist indutseeritud hiirtel oluliselt vähendada lipiidide oksüdatsiooni taset, kaitstes hiiri oksüdatiivse stressi eest.

Kehas on hulk vabu radikaale püüdvaid ensüümide kaitsesüsteeme, nagu SOD, GSH-Px ja CAT, mis eemaldavad sünergistlikult vastavalt superoksiidradikaale, hüdroksüülradikaale ja vesinikperoksiidi [32]Vabade radikaalide oksüdatsioon ja antioksüdant. organismi kaitsesüsteem on dünaamilises tasakaalus. Kui keha puutub kokku oksüdatiivse stressi esilekutsuva stiimuliga, võib see dünaamiline tasakaal häirida. ROS-i liigne tootmine kahjustab valke, lipiide ja nukleiinhappemolekule, mis lõppkokkuvõttes viib organismide vananemiseni ja erinevate haiguste tekkeni [3]. SOD võib muuta superoksiidi radikaalid vesinikperoksiidiks, mis on endiselt tsütotoksiline ja võib Fentoni reaktsiooniga tekitada hüdroksüülradikaale [34]. Hüdroksüülradikaal on üks aktiivsemaid ROS-e, mis suudab reageerida rakus oleva orgaanilise ainega kiire reaktsioonikiiruse ja hävitava toimega [35]. Lisaks võib CAT lagundada hüdroksüülradikaale, et osaleda raku antioksüdantide kaitses [36]. Füsioloogilistes tingimustes saab rakkudes toota antioksüdantseid ensüüme, nagu GSH-Px, et kaitsta neid rakke oksüdatiivsete kahjustuste eest [25]. See uuring näitas, et L. plantarum NJAU-01 võib oluliselt suurendada SOD, GSH-Px, CAT ja T-AOC aktiivsust hiirte seerumis, südames ja maksas, mis näitab, et L. plantarum NJAU-01 leevendab D-galaktoosi põhjustatud oksüdatiivseid kahjustusi. Selle mõju võib seostada kahe aspektiga.L. plantarum NAJU-01 võib soodustada antioksüdantsete ensüümide aktiivsust hiirtel, reguleerides ROS-i tasakaalu normaalsele tasemele hiirtel. Teisest küljest võib see ka eemaldada vabu radikaale ja toimida sünergistlikult SOD, GSH-Px ja CAT-iga, et vähendada oksüdatiivset stressi. Antioksüdantsete ensüümide aktiivsuse reguleerimisest probiootiliste bakterite poolt teatati ka Lactobacillus fermentum [37] ja Lactobacillus fermen-tum ME-3 [38] puhul. See uuring näitab, et L. plan-tarum NJAU-01 avaldab hiirtel antioksüdantset toimet ja on paljulubav alternatiiv sünteetilistele või taimsetele antioksüdantidele. Tavaliselt kasutatakse seda bioallika antioksüdandina vorstieetrite või funktsionaalsete toodete uurimisel [18]. Kuigi LAB antioksüdantse aktiivsuse uuringud on viimastel aastatel pälvinud laialdast tähelepanu, on L. Plantarum NJAU-01 antioksüdatsioonivastase mehhanismi, eelkõige metaboolsete radade, valgu ekspressiooni ja soolestiku regulatsiooni uuringud. taimestik on endiselt napp. Veelgi enam, piimhappebakterite mitmete antioksüdantsete mehhanismide rist ja täiendamine vajavad täiendavat uurimist.

Järeldused

See esialgne uuring tõestas Jinhua singist eraldatud L. Plan-term NJAU-01 mõju D-galaktoosist põhjustatud hiirte vananemismudelile. Leiti, et L. Plantarum NJAU-01 lisamine hiirte söötmisprotsessi ajal võib oluliselt tõsta antioksüdantsete ensüümide aktiivsust ja vähendada MDA sisaldust. See uuring kinnitab L. plan-tarum NJAU-01 võimalikkust bioantioksüdandina ja paneb aluse L. plantarum'i antioksüdantse mehhanismi edasistele uuringutele.

meetodid

Bakteritüvi ja loomapreparaat

L.plantarum NJAU{{0}} (CGMCC14194) sõeluti traditsiooniliselt kuivsoolatud lihatootest Jinhua singist, kasutades morfoloogilisi, biokeemilisi ja molekulaargeneetilisi identifitseerimismeetodeid [15]. Sellel tüvel oli kõrge antioksüdantne aktiivsus ja seda säilitati Yangzhou ülikooli toiduteaduse ja tehnika kolledžis [16]. Lactobacillus Plantarum NJAU-01 säilitati külmutatud (-80 kraadi) varuna De Man, Rogosa, Sharpe (MRS) puljongis (Bio-way Technology Co., Ltd, Shanghai, Hiina), millele oli lisatud 20 protsenti. (maht/maht) glütserool. 1% inokulaadi tüvi aktiveeriti kaks korda ja kasvatati 10 ml MRS puljongis 37 kraadi juures 18 tundi. Seejärel inokuleeriti 100 µl bakterisuspensioon tahkesse MRS-söötmesse automaatse lahjendaja ja taldrikuga (viide 414, 000, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Prantsusmaa). Inokuleeritud MRS tahket söödet kultiveeriti 37 kraadi juures 24 tundi ja elujõuliste arvu loendati automaatse HD koloonialoenduriga (Scan 1200, Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Prantsusmaa) ja Scan kraadiga. tarkvara versioon 8.0 (Interscience, Saint-Nom-la-Breteche, Prantsusmaa). Bakterisuspensiooni kontsentratsioon tuvastati 2 × 10' CFU/ml ja 10 ml tüvekultuuri tsentrifuugiti 6, 000 g juures 10 minutit 4 kraadi juures, et supernatant ära visata. Pelletit pesti kolm korda steriilse soolalahusega ja lahustati seejärel 20 ml steriilses soolalahuses, saades 1 × 10 kraadi FU/ml L. plantarum NJAU-01. Seejärel eemaldati 2 ml bakterisuspensiooni alikvoot kontsentratsiooniga 1 × 10 kraadi FU/ml uude katsutisse, et kombineerida 18 ml steriilse soolalahusega, et saada 1 × 10 kraadi FU / ml bakterid. Analoogiliselt saadi kontsentratsioon 1 × 107 CFU / ml bakterisuspensiooni 1 × 10 kraadi FU / ml lahjendamisega. Katseloomadeks valiti SPF-klassi KM hiired (emased, 4 nädala vanused, kaaluga 18-20 g). Loomasööta ja allapanu pakkus Yangzhou ülikooli (Yangzhou, Jiangsu, Hiina) võrdleva meditsiini instituut. Kõik loomkatsed kiitsid heaks Yangzhou ülikooli loomade heaolu ja eetikakomiteed ning need vastasid institutsionaalse halduskomitee ja laboriloomade eetikakomitee juhistele (IACUC litsentsi number: 201811009). Hiiri tõsteti 20 ± 2 kraadi juures suhtelise õhuniiskusega 55 ± 5 protsenti. Rottidele toideti poolpäevase valguse ja pimeduse tsükli jooksul juhuslikult standardset rottide dieeti (hele faas kell 7.00-19.00). Neli hiirt kasvatati puuris, neid toideti patogeenivaba dieedi ja veega. Kõik materjalid, sealhulgas kaaned, söötjad, pudelid ja voodipesu, autoklaaviti enne kasutamist. Hiired aklimatiseeriti üks nädal enne hiirte vananemismudeli loomist.

Hiirte vananemismudeli loomine

Loodi alaäge D-galaktoosi poolt indutseeritud hiirte vananemise mudel ja viidati Zhao et al. väikeste muudatustega [39]. Galaktoosi manustamismeetod viidi läbi nahaaluse süstimise teel kaela ja selja piirkonda. Kokku 48 SPF hiirt jaotati pärast ühenädalast aklimatiseerumist juhuslikult 6 rühma (8 rotti rühma kohta). Juhuslikud arvud genereeriti Microsoft Exceli standardfunktsiooni =RAND() abil. Hiirtele igas rühmas, välja arvatud kontrollrühm, süstiti subkutaanselt 500 mg D-galaktoosi 1 kg kehakaalu kohta (Shanghai Blue Season Biological Co., Ltd, Shanghai, Hiina) 4 nädala jooksul üks kord päevas (D-galaktoosi lahus, 50 ui. g/l). Kontrollrühmale süstiti 10 ml steriilset soolalahust kehakaalu kilogrammi kohta. Lisaks manustati kolmele ravirühmale maosiseseid annuseid L.cistanche tubulosa dosage redditPlantarum NJAU-01 (10' CFU/mL, 10 kraadi CFU/mL ja 10 kraadi FU/mL) 20 ml kehakaalu kg kohta ja tähistatakse vastavalt LP1 rühma, LP2 rühma ja LP3 rühmana. Kontrollrühma ja vananemisrühma hiiri toideti intragastraalselt steriilse soolalahusega 20 ml/kg päevas. Positiivse kontrollrühma hiiri raviti 1 mg/ml C-vitamiiniga (Vc) 20 ml/kg päevas. Kogu katse kestis neli nädalat.

Koeproovide ettevalmistamine

Hiired surmati teadvuseta 3-protsendilise isofluraani intraperitoneaalse süstimisega. Surma kontrollimise kriteeriumina kasutati südamelöökide lakkamist ja mittereageerimist kahjulikele stiimulitele (tagakäpa pigistus). Hiirtelt eemaldati silmamuna ja võeti veri. Seejärel tsentrifuugiti verd kohe 3, 00xg juures 10 min 4 kraadi juures, et saada seerum ja seda säilitati kuni analüüsimiseni -20 kraadi juures. Pärast eutaneerimist hukati hiired alateadlikult, tõmmates kaelalülisid, ning koguti maks, süda, põrn, neer, kops ja aju ning neid kaaluti, et määrata elundiindeksid. Maksa- ja südameproovid homogeniseeriti 10% koe homogenaadiks 0,9% NaCl-ga ja supernatant koguti tsentrifuugimisega, nagu ülalmainitud.

Parameetrite tuvastamine

T-AOC ja SOD, GSH-Px ja CAT antioksüdantsed ensümaatilised aktiivsused ning MDA sisaldus määrati antioksüdantide kogumahu testi komplekti (ABTS meetod, A015-2-1), superoksiiddismutaasi (SOD) testi abil. komplekt (WST-1 meetod, A001-1-2), glutatioonperoksidaasi (GSH-PX) analüüsikomplekt (kolorimeetriline meetod, A0060201), katalaasi (CAT) analüüsikomplekt (kolorimeetriline meetod, A007-2-1 ) ja malondialdehüüdi (MDA) testikomplekt (TBA meetod, A003-2-1). Kõik komplektid osteti ettevõttelt Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute Co, Ltd (Nanjing, Jiangsu, Hiina). Kõiki proove testiti kolmes eksemplaris ja tuvastamisprotseduurid viidi läbi vastavalt juhistele.

Statistiline analüüs

Andmeid analüüsiti tarkvara Data Processing System 7.{2}}5 abil (Hangzhou Ruifeng Information Technology Co., Ltd, Hangzhou, Hiina). Erinevaid vahendeid võrreldi Duncani uue kompleksse vahemiku meetodiga. Statistilise olulisuse test viidi läbi tasemel 0,05 (P<>

See artikkel on välja võetud Ge et al. BMC Microbiology (2021) 21:182 https://doi.org/10.1186/s12866-021-02248-5