Abstraktne:Ultraviolettkiirgus (UV) põhjustab naha fotovananemist, mis põhjustab naha kortsude teket ja lõtvumist reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) tootmise kaudu. Sel põhjusel on kaitse fotovananemise eest kosmeetika- ja dermatoloogiatoodete oluline omadus. Looduslikest toodetest saadud biomaterjalid on tulevaste võimalike koostisosadena väga soovitud, kuna need biomaterjalid on sageli ohutud ja tõhusad. Selles uuringus püüdsime iseloomustada Pradosia multisiidi naha kaitsvat toimet, mida traditsiooniliselt kasutatakse päikesepõletuse ja erüteemi raviks. Me määrasime Pradosia multisite (Pm-ME) metanooliekstrakti vabade radikaalide eemaldamise, melanogeense ja niisutava toime keratinotsüütides (HaCaT rakud), melanotsüütides (B16F10 rakud) ja fibroblastides (inimese naha fibroblastid (HDF)). mittetsütotoksilised kontsentratsioonid. Pradosia mitmekohaline metanooliekstrakt sisaldab peamise komponendina kumarhapet ja ekstraktil oli kaitsev toime UVB- ja H2O{8}}indutseeritud tsütotoksilisuse vastu. See ekstrakt pärssis ka metalloproteinaaside (MMP) ja tsüklooksügenaasi (COX) -2 ekspressiooni HaCaT rakkudes. Sirt{10}} ekspressiooni vähenemine UVB- ja H2O2--ga töödeldud tingimustes tuvastati HaCaT rakkudes Pm-ME abil. See ekstrakt näitas 2,20 -kasiino-bis (3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhappe) diammooniumisoola (ABTS) testi kohaselt märkimisväärset vabade radikaalide püüdmise aktiivsust. Pm-ME suurendas ka hüaluroonhappe süntaasi (HAS) ja transglutaminaasi -1 (TGM-1) ekspressioonitasemeid HaCaT rakkudes, mis viitab oletatavale niisutavale aktiivsusele. Huvitaval kombel leiti, et 1. tüüpi kollageeni (Col1A1) geeni ekspressioon ja selle promootori aktiivsus, mida hinnati reportergeeni testiga, on HDF- ja HEK293 rakkudes suurenenud. Samamoodi aitas Pm-ME taastada kollageeni taset pärast UVB- ja H2O2-ravi HDF-ides, samuti vähendas melaniini sünteesi ja sekretsiooni B16F10 melanoomirakkudest, mis võib viidata kasulikule valgendavale kosmeetilisele väärtusele. P38 inhibiitor SB203580 ja JNK inhibiitor SP600125 pärssisid MMP-9 ja COX-2 ekspressiooni H2O2--ga töödeldud HaCaT rakkudes. Samamoodi inhibeeris ERK inhibiitor U0126 HAS-2 Pm-ME/H2O2--ga töödeldud HaCaT rakkudes. Need leiud viitasid sellele, et Pm-ME võib olla suunatud JNK ja p38 inhibeerimisele ja ERK aktiveerimisele. Seetõttu võib Pm-ME avaldada vananemisvastaseid ja melanogeenseid omadusi mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaasi reguleerimise kaudu, mis võib olla kasulik kosmeetikatööstuses.

Asjakohaste uuringute kohaseltcistancheon tavalineürtmida tuntakse kui "imerohtu, mis pikendab eluiga". Selle põhikomponent ontsistanosiid, millel on erinevad mõjud naguantioksüdant, põletikuvastanejaimmuunfunktsiooni edendamine. Mehhanism cistanche janaha valgendamineseisneb tsistanche glükosiidide antioksüdantses toimes. Inimese nahas sisalduv melaniini toodaboksüdatsioontürosiinist, mida katalüüsibtürosinaas, ja oksüdatsioonireaktsioon nõuab hapniku osalemist, nii et hapnikuvabad radikaalid kehas muutuvad oluliseks mõjutajaks.melaniintootmine. Tsistanche sisaldab tsistanosiidi, mis on antioksüdant ja võib vähendada selle teketvabad radikaalidorganismis, pärssides seega melaniini tootmist.

Valgendamiseks klõpsake valikul Cistanche Tubulosa toidulisand

Küsi lisa:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Sissejuhatus

Nahk on keha suurim organ, mis toimib barjäärina organismi ja keskkonna vahel ning vastutab naha homöostaasi säilitamise ja lõpuks organismi ellujäämise eest [1]. Nahk on korrastatud epidermisega, dermis koos adnexaalsete struktuuridega ja nahaalune rasv [2]. Lisaks on nahk oluline pidevaks suhtlemiseks immuun-, närvi- ja endokriinsüsteemiga [3], see kaitseb enamasti patogeenide, kemikaalide, füüsiliste vigastuste ja ultraviolettkiirguse (UV) kiirguse eest [4]. Ultraviolettspektrid jagunevad kolmeks tsooniks: UVC (200–280 nm), UVB (280–320 nm) ja UVA (320–400 nm) [5]. Neist UVB neeldub valdavalt nii naha epidermise ülemistes kihtides kui ka papillaarses pärisnahas, samas kui UVA tungib läbi retikulaarse dermise 1000 korda väiksema efektiivsusega erinevate bioloogiliste mõjude esilekutsumisel, võrreldes UVB-ga [5]. Kuigi UVC on väga reaktiivne ja neeldub sarvkihti, eemaldab selle enamasti osoonikiht ja atmosfäär. Peamise UV-kiirguse allikana võib UVB põhjustada reaktiivsete hapnikuliikide (ROS), nagu vesinikperoksiidi (H2O2) tootmist ROS-i genereerivate ensüümide, sealhulgas NADPH oksüdaasi, ksantiini oksüdaasi ja D-aminohappe oksüdaasi aktiveerimise kaudu [6– 8] ja naha fotovananemise esilekutsumine, mis põhjustab naha kortsude teket ja lõtvumist [9,10]. Lisaks on teatatud, et oksüdatiivne stressivastus kutsub esile mitmesuguseid rakukomponentide kahjustusi, nagu rakumembraani lipiidid, valgud ja nukleiinhapped [11]. Need kahjustatud naharakud võivad algatada põletikulisi reaktsioone, mis võivad põhjustada krooniliselt avatud nahal avalduvaid kahjustusi [12].

Oksüdatiivne stress kutsub esile põletikuliste ja redoks-tundlike transkriptsioonifaktorite, tuumafaktori (NF)-κB ja aktivaatorvalgu (AP) -1 ning nende ülesvoolu signaali edastavate ensüümide, sealhulgas mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaaside (MAPK-de), nagu rakuvälised, aktivatsiooni. signaaliga reguleeritud kinaasi (ERK), p38 ja c-Jun-N-terminaalse kinaasi (JNK) AP-1 rajas või κB (IκB ), IκB kinaasi (IKK / ) ja AKT NF-κB rajal on seotud põletiku esilekutsumisega ja kortsude moodustumisega [13]. Ekstratsellulaarse signaaliga reguleeritud kinaas vahendab tavaliselt rakulisi vastuseid, mis on seotud kasvufaktorite, JNK-ga ja p38-vahendatud rakulisi vastuseid, mis on seotud tsütokiinide ja füüsilise stressiga [14]. Mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaasid võivad indutseerida ka proteolüütilise maatriksi metalloproteinaaside (MMP) tootmist [15], mis indutseerivad kollageeni lagunemist, vähendades seega naha elastsust [16]. Nende komponentide osas antioksüdatiivsed komponendid või ekstraktid, nagu ginsenosiid, kurkumiin, epikatehiin, asiatikosiid, zijuglükosiid I, magnolool, gallushape, hüdroksüchavikool, hüdroksükaneelhapped, glütsürritsiinhape, mangiferiin, mirko, rosmariinhape, GF1K tektorigeniin ja, Spartium junceum L. järgijate hüdroalkohoolset ekstrakti on kasutatud naha vananemisvastaste toodete väljatöötamiseks [17–21]. Kuna oksüdatiivne stress on inimeste haiguste ja vananemisprotsesside peamine põhjus, mis mõjutab pikaealisust, on sekundaarsed bioaktiivsed metaboliidid inimeste toitumisesaantioksüdatiivsed omadusedpeetakse väärtuslikeks koostisosadeks [22,23].

Teiste fotovananemisega seotud geenide hulka kuuluvad tsüklooksügenaas-2 (COX-2) ja Sirt-1. Tsüklooksügenaas-2 on tavaliselt üleekspresseeritud pahaloomuliste UV-indutseeritud nahakahjustuste korral [24] ja selle inhibeerimine võib vähendada pahaloomulist transformatsiooni epidermises [25]. Sirt-1 ekspressioon võib takistada raku apoptoosi ja suurendada rakkude ellujäämist [26]. Teine UVB-kiirguse eest kaitsmise mehhanism on melaniini, melanotsüütides sünteesitava pigmendi tootmine, mis eritub edasi epidermise kihi keratinotsüütidesse [1]. Melaniini toodetakse L-türosiini oksüdeerimisel ja selle muundamisel L-dihüdroksüfenüülalaniiniks (L-DOPA) [6], katalüüsides vasest sõltuva ensüümi türosinaasiga [27]. Vaatamata oma kaitsefunktsioonile võib melaniini liigne tootmine tekitada vanuselaike [28], melismat ja hüperpigmentatsiooni [29]. Seoses praeguse trendiga, mille kohaselt peetakse ilustandardiks heledat jumet, on farmaatsia- ja kosmeetikatööstuses muutunud ülimalt ihaldusväärseteks nahka valgendavad preparaadid, mis saavutavad kas hüperpigmenteeritud kahjustuste pleegitamise või naha valgendamise [29]. Seega on tehtud märkimisväärseid jõupingutusi melaniini sünteesi vähendavate preparaatide väljatöötamiseks [30]. Kuna naha vananemist seostatakse naha niiskuse kadumisega, on terve naha säilitamisel oluline piisav hüdratatsioon [31]. Hüaluroonhape (HA), hüdrofiilsete omadustega kõrge molekulmassiga glükosaminoglükaan, aitab kaasa naha niisutamisele ja plastilistele omadustele, reguleerides hüaluroonhappe süntaaside (HAS) ekspressiooni [32]. Teine oluline geen nahas on kollageen, mis toetab epidermise struktuure [33], vastutades seega naha tugevuse ja elastsuse eest [34] ning mille lagunemine põhjustab nii naha lõtvumist kui ka kortsude teket. Lisaks on transglutaminaas-1 (TGM-1) epidermises konstitutiivselt ekspresseeritud ensüüm, mis katalüüsib korniseeritud epidermise rakuümbrise moodustumist, aidates ära hoida veekadu [35,36].

Sapotaceae perekond on levinud peamiselt Aasia ja Meso-Ameerika troopilistes ja subtroopilistes piirkondades. Paljud Sapotaceae perekonna liigid toodavad suure majandusliku väärtusega söödavaid vilju. Neid puuvilju on kasutatud meditsiinilistel eesmärkidel. Eelkõige on seemned rikkad toitainete, taimsete rasvade, valkude ja muude kasulike ühendite poolest. Näiteks mameyõli on traditsiooniliselt kasutatud nahahoolduses, päikesepõletuste ja erüteemi raviks [37]. Pradosia muusika kuulub perekonda Sapotaceae, mille õli on traditsiooniliselt kasutatud nahaarmide ravimiseks [38]. Selle omadusi pole aga veel teaduslikult tõestatud. Selle uurimistöö eesmärk oli seega välja selgitada P. mutisii potentsiaalne väärtus nahahoolduses, kosmetoloogias ja farmakoloogias.

2. Tulemused

2.1. Pm-ME iseloomustus ja selle mõju rakkude elujõulisusele

Vastavalt 3-(4,{{) Pm-ME ei blokeerinud elujõulisust kuni 100 µg/ml, kuid vähendas veidi elujõulisust 200 µg/ml juures HaCaT, B16F10 ja inimese dermaalsete fibroblastide (HDF) rakkudes. 7}}dimetüültiasool-2-üül)-2,5-difenüültetrasooliumbromiidi (MTT) test (joonis 1a–c). Kasutades ülikõrgsurvevedelikkromatograafiat (UHPLC) ja vedelikkromatograafiat (LC)/massispektromeetriat, leiti, et Pm-ME peamine ühend on 4,27 minuti juures kumarhape (joonis 1d).

2.2. Pm-ME kaitsev toime UVB ja H2O2 kahjustuste eest

Et teha kindlaks, kas Pm-ME kaitses HaCaT rakke UVB- ja H2O2--indutseeritud fotovananemisest põhjustatud kahjustuste eest, töödeldi rakke enne kokkupuudet Pm-ME erinevate kontsentratsioonidega (0–100 µg/mL). UVB või H2O2. Joonisel fig 2a on näidatud, et UVB-kiirgus vähendas kleepuvate HaCaT-rakkude arvu, samas kui Pm-ME suurendas rakkude kleepumist. Lisaks taastas Pm-ME H2O2 poolt põhjustatud rakukahjustused 100 µg/ml juures (joonis 2b). Selgitamaks, kas Pm-ME nõrgendas UVB- ja H2O2-vahendatud kortsude moodustumist, mõõdeti MMP-1 ja MMP-9 ekspressioonitasemeid pärast UVB- või H2O2-töötlust UVB- või H2O2-ravi juuresolekul või puudumisel. Pm-MINA. Pm-ME inhibeeris mõlemal tingimusel MMP-1 ja MMP-9 ekspressiooni (joonis 2c, d). Järgmisena uurisime, kas Pm-ME pärssis vabade radikaalide poolt indutseeritud põletikulisi reaktsioone, mõõtes COX-2 mRNA taset. UVB- või H2O2--töödeldud tingimustes surus Pm-ME COX-2 mRNA tasemeid tugevalt alla 100 µg/ml juures (joonis 2e, f). Seejärel mõõtsime vananemisvastase geeni Sirt-1 mRNA taset, et teha kindlaks selle mõju fotovananemisele. Nii UVB kui ka H2O2 vähendasid Sirt-1 ekspressiooni, samas kui Pm-ME taastas oma ekspressiooni märkimisväärselt 50 ja 100 µg/ml juures (joonis 2g, h). Kuna Pm-ME pärssis UVB või H2O2-ga töödeldud HaCaT rakkudes teatud molekulaarseid ja rakulisi vastuseid, uurisime järgmiseks, kas sellel ekstraktil on otsene antioksüdatiivne toime, kasutades 2,2'-kasiinobis (3-etüülbensotiasoliini{{57). }}sulfoonhape) ABTS test, milles Pm-ME näitas annusest sõltuvat vabade radikaalide püüdmise aktiivsust (joonis 2i).

2.3. Pm-ME niisutav ja kollageenisisaldust suurendav toime

Pm-ME suurendas HaCaT rakkudes niisutamisega seotud geenide nagu HAS-2 ja TGM-1 ekspressiooni (joonis 3a). Et teha kindlaks, kas Pm-ME võib suurendada kollageeni geeni (Col1A1) ekspressiooni, töödeldi esmalt HDF-rakke Pm-ME-ga (0–100 µg/mL) ja seejärel määrasime Col1A1 ekspressioonitaseme. Nagu joonisel fig 3b on näidatud, täheldati annusest sõltuvat Col1A1 geeni suurenenud ekspressiooni Pm-ME ravitingimustes. Neid tulemusi kinnitati veel reportergeeni testiga Col1A1-Luc konstruktiga, mis oli transfekteeritud HEK293 rakkudesse ja HDF rakkudesse. Eeldatavasti suurendas Pm-ME Col1A1 geeni promootori aktiivsust mõlemas rakus annusest sõltuval viisil (joonis 3c, d). Lisaks leiti, et Pm-ME taastab kollageeni geenitaseme, mis vähenes nii UV-kiirguse kui ka H2O2 ravi tingimustes (joonis 3e, f).

2.4. Pm-ME melanogeenne toime

Kuna meie sihtkontsentratsioon vastas 100 µg/ml, tegime kindlaks, kas Pm-ME suutis pärssida melaniini sekretsiooni ja selle rakusisaldust. Selle määramiseks stimuleeriti B16F10 melanoomirakke -melanotsüüte stimuleeriva hormooni (-MSH) poolt Pm-ME või arbutiini juuresolekul või puudumisel (positiivne kontroll). Seejärel mõõdeti melaniini taset. Pm-ME vähendas melaniini sekretsiooni 100 µg/ml juures kuni 75 protsendini (joonis 4a, b). Pm-ME vähendas ka melaniini sisaldust MSH-ga töödeldud B16F10 rakkudes kuni 30 protsendini 100 µg/ml juures, samas kui melaniini sisaldus 50 µg/ml juures ei vähenenud oluliselt võrreldes positiivse kontrolliga (-MSH) (joonis 4c). . Lõpuks, et teha kindlaks Pm-ME mõju melaniini tootvate ensüümide aktiivsusele, viisime läbi türosinaasi ensüümi testi. Huvitav on see, et Pm-ME (0–400 µg / ml) vähendas oluliselt türosinaasi aktiivsust kontsentratsioonidel, mis olid kõrgemad kui 200 µg / ml, samas kui kontrollitud ravim Kojic hape (KA) vähendas tugevalt türosinaasi aktiivsust (joonis 4d).

2.5. Pm-ME-vahendatud vananemisvastase ja niisutava toime molekulaarsed mehhanismid

3. Arutelu

Nende toitainete ja vitamiinide rikkuse tõttu on traditsioonilises meditsiinis kasutatud erinevaid Sapotaceae perekonna liike [39]. Siiski tuleb veel uurida P. mutisii võimalikku kasutamist kosmeetika- ja farmaatsiatööstuses. Sel põhjusel uurisime P. mutisii nahka kaitsvat toimet keratinotsüütides ja fibroblastides nahka kahjustavates tingimustes. Samuti hindasime selle sobivust kosmeetilisteks preparaatideks. Kuna toksilisuse testimine potentsiaalsete riskide tuvastamiseks inimestel on vajalik ja kriitiline samm nii ravimi- kui ka kosmeetikatööstuses [40], testiti P. mutisii tsütotoksilisust HaCaT, B16F10 ja HDF rakkudes. Pradosia mutisii toksilisus oli madal kuni 200 µg/ml ja 100 µg/ml juures HaCaT, B16F10 (joonis 1a, b) ja HDF rakkudes toksilisus puudus (joonis 3c). Kasutades UHPLC/MS analüüsi (joonis 1c), näidati, et Pm-ME-s on fenoolhappe kumarhappe kõrge kontsentratsioon [41,42]. Polüfenoolid on taimede sekundaarsed metaboliidid ja on üldiselt seotud kaitsega UV-kiirguse või patogeenide poolt põhjustatud infektsioonide vastu. On näidatud, et polüfenoolid kaitsevad inimkehas vähi, südame-veresoonkonna haiguste, diabeedi, osteoporoosi ja neurodegeneratiivsete haiguste eest [1]. On näidatud, et kumarhappel on antioksüdantsed ja põletikuvastased omadused [43].

Ultraviolettkiirgus on üks peamisi vabade radikaalide (nt ROS) tootmise põhjuseid nahas. Vabad radikaalid võivad põhjustada naha vananemist ja vähki, kui need kogunevad pika aja jooksul [44]. On teada, et vabade radikaalide tekitatud oksüdatiivne stress ja kahjustused võivad kahjustada rakkude ellujäämist, proliferatsiooni, diferentseerumist ja ainevahetust [45,46]. Kooskõlas varasemate aruannetega [47, 48] leidsime ka, et UVB-kiirgusest põhjustatud rakukahjustused HaCaT rakkudes. Kahjustused hõlmasid vähenenud proliferatsiooni, suurenenud apoptoosi ja molekulaarseid reaktsioone, sealhulgas põletiku, kortsude moodustumise ja vananemisega seotud geenide ekspressiooni (joonised 2 ja 3). Kuna UVB-indutseeritud radikaalid on peamised rakke, kudesid ja elundeid kahjustavad tegurid, leiti, et mõned endogeensed ühendid, nagu melatoniin ja selle metaboliit [49–52] ning bilirubiin [53], osalevad antioksüdantide abil toksiliste radikaalide eemaldamises. , fotokaitsvad ja vananemisvastased omadused meie kehas. Seni on need ühendid välja töötatud ka väga väärtuslike biomaterjalidena, mida farmaatsiatööstused saavad meie kehale rakendada [54]. Sellegipoolest on C-vitamiinist, koensüümist Q10 ja tokoferoolist saamas inimeste tervise jaoks parimad ülemaailmsed müügitooted, kuna neil on märkimisväärsed antioksüdatiivsed omadused. Farmaatsia- ja kosmeetikaettevõtete uurimislaborid panevad jätkuvalt suurt rõhku tõhusate antioksüdatiivsete ravimite ja looduslike ühendite väljaselgitamisele ja väljatöötamisele. Meie uuringus täheldasime, et Pm-ME-l oli ABTS-testi abil testimisel tugev antioksüdantne toime (joonis 2i). Samamoodi muutis Pm-ME ümber vabade radikaalide poolt indutseeritud rakkude kleepumise pärssimise, tuumakahjustuste esilekutsumise ja geenide, nagu MMP-1, MMP-9 ja COX{{27}, muutunud ekspressiooni. } UVB ja H2O2 tingimustes annusest sõltuval viisil (joonis 2a–f). Nimelt taastas Pm-ME geeni Sirt-1 taseme (joonis 2g, h), mis on seotud apoptoosi ennetamisega ja rakkude ellujäämise suurendamisega oksüdatiivse stressi tingimustes [26]. Need tulemused viitasid tugevalt sellele, et rakkude vananemine oli seotud oksüdatiivse stressiga Sirt1 ekspressiooni allareguleerimise kaudu. Pm-ME antioksüdatiivsed omadused võimaldasid Sirt1 ekspressiooni taastumist. Selle tulemuseks võib olla kaitse nahakahjustuste ja vananemise eest loomulike UVB-kiirguse tingimustes in vivo. Lisaks on võimalik, et Pm-ME suudab kaitsta ka UVC-indutseeritud rakulisi vastuseid, kuna meie UV-kiirguse tingimused võivad olla UVC-ga saastunud, kuigi kasutasime filtrisüsteemi, et puhastada kõik lainepikkused alla 290 nm. Arusaam, et antioksüdatiivsed biomaterjalid võivad leevendada raku- ja molekulaarseid kahjustusi oksüdatiivse stressi tingimustes, on ajendanud erinevate toodete, nagu BIOGF1K, ginsenoside Ro, EGCG, Fraxinus chinensise ekstrakt ja teatud sünteetilised antioksüdandid, kaubanduslikku tootmist. Nendes ja teistes toodetes sisalduvate biomaterjalide kortsude- ja vananemisvastastest toimetest on kosmeetikatööstuses laialdaselt teatatud [48,55,56].

Naha piisava hüdratsiooni säilitamine [31] ja uue kollageeni tootmine [57] on terve naha jaoks olulised protsessid. Pm-ME (joonis 3b–d) suurendas märkimisväärselt niisutavate (HAS2, TGM-1) (joonis 3a) ja kollageeni (Col1A1) geenide ekspressiooni ning see aitas taastada kollageeni taset pärast UVB-kiirgust ja H2O2-ravi (Joonis 3e, f). Seetõttu viitab see sellele, et Pm-ME võib olla tõhus koostisosa terve naha säilitamisel. Melaniini pärssimine Pm-ME poolt on kasulik ka selle kasutamisel kosmeetilistes preparaatides. Kuigi melaniin on väärtuslik naha kaitsmisel UV-kiirguse eest, kuna paljud naised eelistavad nahka heledamaks muuta, on melanogeense toimega valgendamine kosmeetikatoodetes kasulik funktsioon [29]. Pm-ME (100 µg / ml) avaldas melanogeneesi ajal tugevat inhibeerivat aktiivsust, mida hinnati sekreteeritud söötme melaniini taseme määramise ja melaniini sekretsiooni taseme languse põhjal (joonis 4a–c). Veelgi enam, Pm-ME (200 µg / ml) pärssis oluliselt türosinaasi ensüümi aktiivsust (joonis 4d), mis tähendab, et kõrgem kontsentratsioon on ensüümi aktiivsuse pärssimiseks otseselt efektiivne, samas kui madalam kontsentratsioon on seotud melaniini sekretsiooni reguleerimisega. Seetõttu võib Pm-ME oma antioksüdatiivse, vananemisvastase, kortsudevastase, niisutava ja melanogeense toime tõttu pidada heaks kosmeetikakandidaadiks. Selle võimaluse edasiseks uurimiseks kavatseme tulevastes uuringutes hinnata selle kliinilist efektiivsust.

Tegime uuringuid, et teha kindlaks molekulaarsed mehhanismid, mille abil Pm-ME avaldas keratinotsüütides antioksüdatiivset ja niisutavat toimet. Keskendusime MAPK-ga seotud ensüümidele (ERK, JNK ja p38), kuna need ensüümid mängivad kriitilist rolli naha keratinotsüütide ja melanotsüütide vananemises ja melanogeneesis [58,59]. Näiteks ERK rada vahendab rakulisi vastuseid transformeerivale kasvufaktorile- 1, suurendades kollageeni [60] ja HA sünteesi radasid keratinotsüütides [61]. JNK mängib võtmerolli oksüdatiivsest stressist põhjustatud keratinotsüütide apoptoosis [62]. Ensüüm p38 on oluline inimese naha homöostaasi säilitamisel [63]. JNK ja p38 rajad vahendavad nii rakulisi vastuseid tsütokiinidele kui ka füüsilisele stressile [14]. Neid radu aktiveerivad UVB- ja ROS-indutseeritud pinged. Need rajad võivad suurendada proteolüütiliste MMP ja COX-2 geenide tootmist [15], mis on seotud vastavalt kollageeni lagunemise ja nahapõletikuga [64]. Eelkõige blokeeris oksüdatiivne stress ERK fosforüülimise, samas kui p38 ja JNK fosforüüliti, kui neid töödeldi H2O2-ga (joonis 5a). Seevastu suurendas Pm-ME ERK fosforüülimist ja vähendas p38 ja JNK fosforüülimist (joonis 5a), mis tähendab, et need ensüümid võivad erinevalt osaleda Pm-ME-vahendatud farmakoloogilistes aktiivsustes. MAPK funktsionaalse rolli paremaks mõistmiseks Pm-ME vananemisvastases, melanogeenses ja põletikuvastases toimes UVB-kiirgusega ja H2O{36}}stimuleeritud keratinotsüütides kasutati spetsiifilisi MAPK inhibiitoreid. Joonise fig 5b tulemused viitasid tugevalt sellele, et p38 ja JNK inhibeerimine Pm-ME poolt põhjustas kortsude- ja põletikuvastaseid toimeid, kuna p38 inhibiitor (SB203580) ja JNK inhibiitor (SP600125) blokeerisid MMP ekspressiooni{45 }} ja COX-2. Veelgi enam, Pm-ME poolt käivitatud ERK fosforüülimine indutseeris niisutamisega seotud geenide ekspressiooni, kuna Pm-ME-ravi vallandas HAS{50}} ekspressiooni, samas kui U0126 pärssis seda (joonis 5c). Need tulemused näitasid, et MAPK-ga seotud ensüümid aitasid kaasa PM-ME-vahendatud vananemisvastasele, kortsudevastasele ja põletikuvastasele toimele. On teada, et UVB-kiirgus suurendab teisi signaalikaskaade, näiteks neid, mis on seotud NF-κB ja STAT3-ga [65, 66]. Seda, kas Pm-ME saab neid signalisatsiooniteid reguleerida, tuleb veel uurida.

Kokkuvõtteks leidsime, et kumarhappe rikas Pm-ME avaldas UVB-kiirgusega või H2O2-ga töödeldud naharakkudes antioksüdatiivset, kortsudevastast, niisutajat stimuleerivat ja melanogeenset toimet. Pm-ME suurendas ERK fosforüülimist annusest sõltuval viisil, kuid vähendas p38 ja JNK fosforüülimist (joonis 6). Meie tulemused näitasid kindlalt, et Pm-ME võib olla tõhus nahka kaitsev biomaterjal. Kuna Pm-ME avaldas oksüdatiivse stressi tingimustes väga paljutõotavat aktiivsust nii vähi naharakkudes (HaCaT ja B16F10 rakud) kui ka normaalsetes inimese keratinotsüütides, pakume välja Pm-ME kasutamise kasulikud rollid kosmeetilistes preparaatides. Siiski on melanoomirakkudel ebanormaalsed tunnused, nagu häiritud rakutsükli kontroll, hälbivad geeniekspressioonimustrid ja piiratud diferentseerumisvõime [67] ning Pm-ME ja selle melanogeneesivastase aktiivsuse täpseks mõistmiseks tuleb teha täiendavat tööd primaarsete melanotsüütidega. molekulaarne mehhanism. Lisaks testitakse sama perekonna (Sapotaceae) või perekonna (Pradosia spp.) taimi sarnaste nahka kaitsvate toimete suhtes.

Küsi lisa: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501