Kassia fistuli õie butaaniekstrakti vananemisvastased ja türosinaasi inhibeerivad toimed, 1. osa

Abstraktne

Taust: Taimsetest allikatest valmistatud looduslikke tooteid on kasutatud mitmesugustes kosmeetikatoodetes toitumisallikana ja valgendava ainena. Fabaceae perekonda kuuluva Cassia fistula L õisi on kasutatud traditsioonilise ravimina nahahaiguste ja haavade paranemise korral ning neil on teatatud antioksüdantsetest omadustest. Uuriti C. fistula õieekstrakti vananemisvastast toimet inimese naha fibroblastidele.

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja eemaldada reaktiivseid hapniku liike, takistada vabade radikaalide poolt indutseeritud kollageeni lagunemist ning samuti on sellel hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Klõpsake valikul Desert Cistanche eelised

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

meetodid: C. fistula lillede ekstraheerimine butanooliga viidi lõpule ja toimeained klassifitseeriti. Fibroblastide tsütotoksilisust hinnati SRB testiga, et valida edasisteks katseteks mittetoksilised annused. Seejärel mõõdeti kollageeni ja hüaluroonhappe (HA) sünteesi, kasutades vastavalt kollageenikomplekti ja ELISA-d. Lisaks hinnati ka ensüümi aktiivsust, sealhulgas kollagenaasi, maatriksmelloproteinaasi-2 (MMP-2) ja türosinaasi.

Tulemused: Leiti, et lilleekstrakt ei mõjutanud naha fibroblastirakkude kasvu (IC50 > 200 ug/mL). Tulemused näitasid, et lilleekstrakt suurendas oluliselt kollageeni ja HA sünteesi annusest sõltuval viisil. Lilleekstrakt (50–200 ug/ml) pärssis oluliselt ka kollagenaasi ja MMP{5}} aktiivsust. Lisaks võib see lilleekstrakt pärssida türosinaasi aktiivsust, mis põhjustab hüperpigmentatsiooni, mis kutsub esile naha vananemise.

Järeldused: C. fistula lilleekstraktil oli ennetav toime, kui seda kasutati vananemisvastasel eesmärgil inimese naha fibroblastides ja see võib olla sobiv valik kosmeetikatoodete jaoks, mille eesmärk on anda valgendav toime ja mida nimetatakse vananemisvastasteks näonahahooldustoodeteks. .

Märksõnad: kollagenaas, kollageeni süntees, glükosaminoglükaan, hüaluroonhape, maatriksi metalloproteinaas

Taust

Naha vananemine on keeruline biokeemiline progresseerumine, mis tuleneb paljudest individuaalsetest sisemistest ja välistest teguritest, nagu vanus, hormoonid ja kokkupuude UV-valgusega [1]. Progresseerumine toimub epidermise ja dermaalses kihis ning on peamiselt seotud rakuvälise maatriksi (ECM) lagunemisega [2]. ECM-i lagundamisel osalevad ensüümid on maatriksi metalloproteinaasid (MMP-d), nagu želatinaasid (MMP-2) ja kollagenaas [3]. Nahk kaotab oma tõmbetugevuse ECM-i lagunemise mõju tõttu MMP-de poolt. Selle protsessi käigus tekivad naha kortsud ning märgatavalt tekivad ka karedus ja kuivus koos teatud pigmendihäiretega, nagu hüpo- või hüperpigmentatsioon [2, 4]. Hüperpigmentatsiooni raviks on uuritud türosinaasi inhibiitoreid. Türosinaas on kiirust piirav ensüüm, mis muudab türosiini melaniiniks [5]. Türosiini inhibiitorid mängivad seega olulist rolli nahka valgendavate ainetena [6], samas kui hüaluroonhappe (HA) süntees reguleerib naha hüdratatsiooni ja kortsude teket. HA, sulfaadimata glükoosaminoglükaan (GAG), koosneb korduvatest disahhariidide ühikutest, sealhulgas D-glükuroonhape ja N-atsetüül-Dglükoosamiin [7]. HA reguleerib ka kudede paranemist, sealhulgas immuunsüsteemi vastuse tugevdamist põletikuliste rakkude aktiveerimise kaudu ja vastusena fibroblastide vigastustele [8–10].

Taimsetest allikatest, nagu Glycyrrhiza glabra [11] või roheline tee [12] valmistatud looduslikke tooteid on kasutatud kosmeetikatoodetes toitumisallikana ja valgendava ainena. Märkimisväärne hulk tõendeid on osutanud taimeekstraktidest saadud suukaudselt või paikselt manustatavate fütokemikaalide kasulikule mõjule, eriti naha seisundi parandamisel. Mõned näited kasulikest mõjudest on naha vananemise ja nahapõletiku vähendamine. C. fistula (kuldne dušš), perekond Fabaceae, leidub paljudes Aasia riikides, nagu Tai, Hiina, Myanmar ja India. Varasemates uuringutes leiti, et C. fistula õieekstraktil on antioksüdantsed, vähivastased, antibakteriaalsed, seenevastased ja diabeedivastased omadused [13, 14]. C. fistula toime Ayurveda meditsiinis on teadaolevalt seotud mitmesuguste häirete, sealhulgas nahahaiguste, pidalitõve, verevalumi, sügeluse ja diabeedi raviga [15, 16]. C. fistula erinevatel osadel on farmakoloogilised omadused [17]. Lilli, seemneid, puuvilju ja viljaliha on kasutatud nahahaiguste, sealhulgas pidalitõve raviks [18]. Viljaliha on tunnustatud selle diabeedivastaste omaduste poolest [15] ja seda on kasutatud toonikuna, mida on kasutatud podagra ja reuma ravis [19]. Lehti ja küpseid kaunasid on traditsiooniliselt kasutatud lahtistina [20, 21]. Samuti on teatatud, et C. fistula fenoolid ja flavonoidsed fütokemikaalid on kasulikud nahahaiguste ravis [14]. Seetõttu oleme selles uuringus huvitatud C. fistula lilleekstrakti rollidest kosmetseutilistes rakendustes. Uuriti ECM-i lagunemise ennetavat mõju koos naha vananemisensüümidega, mis hõlmavad kollagenaasi ja MMP{13}} aktiivsust, aga ka türosinaasi. Lisaks on kindlaks tehtud kollageeni ja HA süntees.

meetodid

Kemikaalid ja reaktiivid

Dulbecco modifitseeritud kotkasööde (DMEM), DQ želatiin ja penitsilliin-streptomütsiin tarniti firmalt Gibco (Grand Island, NY, USA). Veise loote seerum (FBS) tarniti firmast Thermo Scientific (USA). Sirius Red/Fast Green kollageeni värvimiskomplekt osteti ettevõttelt Chondrex, Inc. (Redmond, WA, USA). Sulforhodamiin B reaktiiv, hüaluroonhape ja seente türosinaas saadi firmast Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

Taimsed materjalid

C. fistula lilled saadi Taist Lampangi provintsist Lampang Herb Conservation. Voucheri näidise numbri (023197) kinnitas Tai Chiang Mai ülikooli farmaatsiateaduskonna Flora herbaariumi botaanik Wannaree Charoensup.

Cassia fistula õie ekstrakti valmistamine

C. fistula õied kuivatati õhurikkas ruumis ja seejärel jahvatati 500 g kuivatatud õisi peeneks pulbriks. Pärast seda leotati pulbrit 50-protsendilises etanoolis ja loksutati seejärel 24 tundi kiirusel 70 p/min. 24 tunni pärast filtriti proovid jäägi eraldamiseks läbi filterpaberi. Jääki leotati 50% etanoolis ja loksutati kiirusel 70 p/min 24 tundi ning seda sammu korrati 2 korda. Filtreeritud proovid liideti kokku ja aurustati veefraktsioonide saamiseks rootorvaakumaurustis (BUCHI, Šveits). Veefraktsioonile lisati heksaani vahekorras 2:1. Proove loksutati ja lasti 30 minuti jooksul eralduda. Proovid jagati kaheks fraktsiooniks, milleks olid heksaani- ja veefraktsioonid. Seejärel veefraktsioon koguti ja 30 minutiks lisati toatemperatuuril kergelt segades 10 protsenti sütt. Proovid filtriti söe eraldamiseks läbi filterpaberi ja tseliidi. Proovid segati küllastunud butanooliga vahekorras 2:1 ja proovidel lasti eralduda 12 tunni jooksul ning seda sammu korrati 3 korda. Proovid jagati kaheks fraktsiooniks, mis sisaldasid vee- ja butanoolifraktsioone. Butanoolifraktsioonidele lisati veel võrdses mahus vett ja neil fraktsioonidel lasti aurustuda rotatsioonvaakumaurusti abil. Aurutatud proovid külmkuivatati, et saada C. fistula õieekstrakti pulber.

C. fistula õieekstrakti fenooli üldsisalduse kvantifitseerimine UV-nähtava spektrofotomeetri abil

Fenooli üldsisaldus C. fistula õieekstraktis määrati Folin-Ciocalteu testiga. Lühidalt, 0,4 ml C. fistula lilleekstrakti segati 0,3 ml 10 protsendilise Folin-Ciocalteau reagendiga ja inkubeeriti pimedas toatemperatuuril 3 minutit . Seejärel lisati 0,3 ml naatriumkarbonaadi lahust ja lahust inkubeeriti veel pimedas toatemperatuuril 30 minutit. Neeldumist hinnati lainepikkusel 765 nm, kasutades UV-nähtava spektrofotomeetrit. Arvutati kogu fenoolisisalduse kontsentratsioon ja võrreldi gallushappe (GA) standardkõveraga 0–20 ug/ml. Fenooli üldsisaldus esitati milligrammides GA ekvivalentidena C. fistula grammi kohta. lilleekstrakt (mg GAE/g ekstrakt).

Fenoolsete ühendite kvantifitseerimine C. fistula õieekstraktis HPLC analüüsi abil

Erinevat tüüpi fenoolseid ühendeid C. fistula lilleekstraktides analüüsiti HPLC analüüsi abil ja seejärel võrreldi standardse gallushappe, katehhiinide, protokatehhuiinhappe, vanillhappe, klorogeenhappe, feruulhappe ja kumarhappega. Lilleekstraktid lahustati 50 protsendilises etanoolis ja neid hinnati täiendavalt HPLC-ga (Agilent Technologies, CA, USA), kasutades pöördfaasi C18 kolonni (WATER, MA, USA). Liikuv faas koosnes metanoolist (A) ja 0,1 protsendilisest trifluoroäädikhappest (TFA) vees (B) gradienttingimustega. Voolukiiruseks määrati 1,0 ml/min ja tuvastamise lainepikkus registreeriti UV-detektoriga 280 °C juures. Arvutati fenoolsete ühendite kontsentratsioonitasemed ja võrreldi standardkõveraga standardkontsentratsioone ja piikide pindalasid (mg/g ekstrakti).

Flavonoidide kogusisalduse kvantifitseerimine C. fistula õieekstraktis kolorimeetrilise analüüsi abil

Flavonoidide kogusisaldus määrati modifitseeritud alumiiniumkloriidi (AlCl3) kolorimeetrilise testiga, nagu eelnevalt kirjeldatud [22]. Lühidalt, 0,25 ml lilleekstrakti segati 0,125 ml 5% naatriumnitritiga (NaNO2) ja lahust inkubeeriti 5 minutit toatemperatuuril. Seejärel segati segusse 0,125 ml 10% AlCl3 ja seda hoiti 5 minutit pimedas. Seejärel lisati 1 ml naatriumhüdroksiidi (NaOH) ja lahust inkubeeriti 15 minutit toatemperatuuril pimedas. Neeldumist mõõdeti lainepikkusel 510 nm, kasutades UV-nähtava spektrofotomeetrit. Flavonoidide kogusisaldus arvutati ja võrreldi standardsete katehhiini väärtustega ning väljendati mg katehhiini ekvivalendina ühe grammi ekstrakti kohta (mg CE/g ekstrakti).

Rakukultuurid

Primaarsed inimese naha fibroblastid eraldati aseptiliselt kõhupiirkonna armist pärast kirurgilist protseduuri, mis hõlmas keisrilõiget Chiang Mai ülikooli (Chiang Mai, Tai) CM Maharaj haigla kirurgilises osakonnas (uuringu kood: BIO-2558-03549, mille on heaks kiitnud Medical Chiang Mai ülikooli teaduseetika komitee). Lähtematerjalist eemaldati rasv ja see leotati penitsilliinivastast ja streptomütsiini sisaldavas DMEM-is. Pärast seda sukeldati nahk 1% proteaasi sisaldavasse DMEM-i (Dispase, Gibco, Grand Island, NY, USA) 48 tunniks 4 kraadi juures. Epidermaalsed kihid eemaldati ja normaalsed fibroblastid eraldati pärisnahast. Fibroblaste kultiveeriti DMEM-is, millele oli lisatud 10% FBS-i, 2 mM L-glutamiini, 50 U/ml penitsilliini ja 50 ug/ml streptomütsiini. Rakke hoiti 5% CO2 niisutatud inkubaatoris 37 kraadi juures.

Rakkude elujõulisuse test

C. fistula lilleekstrakti rakkude elujõulisuse test naha fibroblastirakkude suhtes mõõdeti sulforodamiin B (SRB) testiga, nagu eelnevalt kirjeldatud [23]. Lühidalt, rakud (8x1{8}}3 rakku süvendi kohta) külvati 96-süvendiga plaadile ja inkubeeriti 37 kraadi juures 5% CO2 juures 24 tundi. Seejärel töödeldi rakke 48 tundi C. fistula lilleekstraktiga või ilma erinevate kontsentratsioonide (0–200 ug/ml)ta. 48 tunni pärast lisati rakkudele 10% (mass/maht) trikloroäädikhapet (TCA) ja seejärel inkubeeriti rakke 4 kraadi juures 1 tund. Sööde eemaldati ja rakke loputati aeglaselt voolava kraaniveega. Igasse süvendisse lisati 0,057% (mass/maht) SRB lahust (100 μL) ja rakke inkubeeriti 30 minutit toatemperatuuril. SRB lahus eemaldati ja seejärel pesti rakke 4 korda 1% (maht/maht) äädikhappega ja lasti toatemperatuuril kuivada. Värv lahustati 10 mM Tris-aluse lahuses (pH 10,5) ja neeldumist mõõdeti 510 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat.

Kollageeni sünteesi test

Kogu intratsellulaarne kollageen fibroblastirakkudes määrati, kasutades Sirius Red/Fast Green Collagen Staining Kit (Chondrex, Inc, Redmond, WA, USA) vastavalt tootja juhistele. Lühidalt, naha fibroblastirakud külvati 24 süvendiga plaatidele 24 tunniks temperatuuril 37 kraadi 5% CO2. Pärast seda töödeldi rakke 24 tundi seerumivaba DMEM söötmega. Sööde eemaldati ja rakke inkubeeriti 48 tundi C. fistula õieekstraktiga (0-150 ug/mL) või ilma. 48 tunni pärast kultiveeritud sööde eemaldati. Seejärel pesti rakke PBS-ga ja fikseeriti Kahle fiksaatoriga 10 minutit. Fiksaator eemaldati ja rakke pesti PBS-ga. Igasse süvendisse lisati Sirius Red/Fast Green värvilahus ja proove inkubeeriti 30 minutit toatemperatuuril. Värv eemaldati ja rakke pesti neli korda DI veega või kuni vedelik oli värvitu. Lõpuks lisati ekstraheerimispuhver ja neeldumine mõõdeti lainepikkustel 540 nm ja 605 nm, kasutades UV-nähtava spektrofotomeetrit.

Kollagenaasi aktiivsuse test

Kollagenaasi aktiivsust mõõdeti modifitseeritud fluorogeense DQ™-želatiini testiga, nagu on eelnevalt kirjeldatud [24]. Lühidalt, 96 süvendiga plaatidele lisati erinevates kontsentratsioonides C. fistula lilleekstrakti (0–200 ug/ml). Igasse süvendisse lisati üks U/ml kollagenaasi (100 µl süvendi kohta). Seejärel lisati 15 ug/ml želatiini (DQ želatiin) ja segusid inkubeeriti 10 minutit. Proteolüüsi kiirus määrati neeldumise mõõtmisega 2-minutilise intervalliga 20 minuti jooksul, kasutades mikroplaadilugejat ergastuslainepikkusel 485 nm ja emissioonilainepikkusel 528 nm. Ensüümi aktiivsust hinnati aja ja neeldumise vahelise lineaarse regressiooni nõlva uurimisel 2-6 minuti jooksul.

MMP{0}} aktiivsuse test

MMP{{0}} aktiivsus määrati želatiini sümograafia abil, nagu eelnevalt kirjeldatud [25]. Fibroblasti rakke kultiveeriti DMEM seerumivabas söötmes 24 tundi. Pärast seda koguti kultuuri supernatant. Kultuuri supernatant allutati mitteredutseerivates tingimustes 10% polüakrüülamiidgeelidele, mis sisaldasid 0,1% w/v želatiini. Geele pesti kaks korda 2,5 mahuprotsendilise Triton X-100-ga 30 minutit toatemperatuuril, et eemaldada SDS. Geeli plaat lõigati viiludeks, mis vastasid radadele, seejärel viidi viilud erinevatesse mahutitesse ja inkubeeriti aktiveeriva puhvriga (50 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 10 mM CaCl2, pH 7,4), mis sisaldas erinevas kontsentratsioonis C. fistuli õie ekstrakt (0–200 ug/mL) 37 kraadi juures 18 tundi. Pärast seda pesti geeliriba ja värviti Coomassie Brillant Blue R-ga (0,1% (mass/maht)) ning seejärel värviti 30% metanoolis ja 10% äädikhappes. MMP-2 tegevus ilmus sinisel taustal selge ribana. Seedimisribad kvantifitseeriti programmi Image J abil.

Hüaluroonhappe (HA) sünteesi test ELISA abil

C. fistula õieekstrakti mõju HA sünteesile määrati ELISA komplekti abil, nagu eelnevalt kirjeldatud [26]. Fibroblastirakud (50 × 104 rakku süvendi kohta) külvati 24-süvendiga plaatidele 24 tunniks temperatuuril 37 kraadi 5% CO2. Rakke töödeldi eelnevalt seerumivabas söötmes 6 tundi ja seejärel töödeldi 48 tundi C. fistula lilleekstraktiga või ilma erinevate kontsentratsioonideta (0–200 ug/ml). Kultiveeritud sööde koguti ja HA sünteesi mõõdeti ELISA abil. Neeldumist mõõdeti lainepikkustel 450 ja 570 nm, kasutades mikroplaadilugejat. Arvutati HA kontsentratsioon töödeldud fibroblastirakkudest saadud kultiveeritud supernatandis ja võrreldi HA standardkõveraga.

Türosinaasi inhibeerimise test

Türosinaasi inhibeerimise test määrati eelnevalt kirjeldatud viisil [27]. Erinevates kontsentratsioonides C. fistula lilleekstrakti lisati 96-kaevuplaadile. Reaktsioon viidi läbi naatriumpuhvris (pH 6,4), mis sisaldas 100 U/ml seene türosinaasi. Reaktsioonisegule lisati L-DOPA substraat (1 mM) ja seejärel inkubeeriti 10 minutit toatemperatuuril. Neeldumise muutust lainepikkusel 490 nm mõõdeti mikroplaadilugejaga iga 1,5 minuti järel 15 minuti jooksul. Türosinaasi inhibeerimise protsent arvutati järgmise valemiga:

Antioksüdandi aktiivsuse test

C. fistula lilleekstrakti antioksüdantne aktiivsus määrati 1, 1-difenüül-2-pikrüülhüdrasüüli (DPPH)-vabade radikaalide aktiivsuse abil, nagu eelnevalt kirjeldatud [28]. Metanoolis valmistati lilleekstrakti erinevad kontsentratsioonid (0–100 ug/mL). 1 ml õieekstrakti lahusele lisati 1 ml 0,002 protsenti DPPH-d ja segu hoiti 30 minutit pimedas. Neeldumist mõõdeti spektrofotomeetriga lainepikkusel 517 nm. Inhibeerimise protsent arvutati ja võrreldi standardse E-vitamiiniga (1–100 ug/ml), kasutades järgmist valemit:

C. fistula lilleekstraktide antioksüdantne aktiivsus kinnitati ABTS-testi abil, nagu eelnevalt kirjeldatud [29]. ABTS [2,2'-asino-bis(etüülbenstiasoliin-6-sulfoonhape)] radikaali katioon valmistati 7 mM ABTS põhilahuse segamisel 2,45 mM kaaliumpersulfaadiga (K2S2O8) (1/1, v/v). Segu inkubeeriti pimedas 12–16 tundi, kuni reaktsioon oli lõppenud. Analüüs viidi läbi 990 μL ABTS lahuse ja 10 μL õieekstraktiga (0–4 ug/ml). 6 minuti pärast registreeriti spektrofotomeetriga kohe neeldumine lainepikkusel 734 nm. Lilleekstrakti ABTS-i aktiivsuse inhibeerimise protsent arvutati järgmise võrrandi abil:

Statistiline analüüs

Kõik andmed on esitatud keskmiste ± standardhälbe (SD) väärtustena. Statistilist analüüsi analüüsiti Prism versiooni 6.{1}} tarkvaraga, kasutades Dunnetti testiga ühesuunalist ANOVA-d. Statistiline olulisus määrati * p < 0.05, ** p < 0.01, ***p < 0,001 või **** p < 0,0001.

Tulemused

C. fistula õieekstrakti fütokeemiline iseloomustus

Pärast proovide külmkuivatamist hõlmavat etappi kaaluti C. fistula õieekstrakt ja viidi läbi fütokeemilised ja bioloogilised uuringud. 18.0500 g toorainest saadi 8 g C. fistula õieekstrakti ja õieekstrakti protsentuaalne saagis oli 3,62. C. fistula õieekstraktide HPLC sõrmejälg määrati HPLC analüüsiga (joonis 1). HPLC profiil, mis näitas fenoolsete ühendite piike, märgistati üksikute komponentide järgi igal retentsiooniajal. C. fistula õieekstrakti fenoolsete ühendite iseloomustus on toodud tabelis 1. Fenooli üldsisaldus lilleekstraktis oli 275,32 ± 14,21 mg GAE/g ekstrakti kohta. Hüdroksübensoehappe derivaadid, sealhulgas vanillhape ja protokatehhuiinhape, leiti olevat {{20}},95 ± 0.09 ja 2,56 ± 0. Ekstrakt oli vastavalt 42 mg/g, samas kui gallushape registreeriti väärtusel {{30}},60 ± 0,02 mg/g ekstrakti. Hüdroksükaneelhappe derivaadid, sealhulgas kumarhape, feruulhape ja klorogeenhape, tuvastati vastavalt 0,39 ± 0,08, 0,80 ± 0,09 ja 0,83 ± 0,03 mg/g ekstrakti kohta. Flavonoidide sisaldus oli 27,62 ± 3,56 mg CE/g ekstrakti. Katehhiini kui flavonooli derivaadi sisalduseks mõõdeti 1,10 ± 0.{43}} mg/g ekstrakti kohta.

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】