Akteosiid: antioksüdantide ja antihüpertensiivse toime uurimine

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Akteosiidi ja selle analoogide antioksüdant ja antihüpertensiivne toime

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* ja Miao-Lin HU1,*

Abstraktne. Akteosiid(Act), fenüületanoidglükosiid, on aktiivne ühend mitmetes taimedes ja traditsioonilistes taimsetes ravimites. Toimige koos selle struktuurse isomeeriga,isoakteosiid(Isoact) ja analoog, 6-O-atseet-lakteosiid (6-O-atsetülakt), kasutati uuringus, et uuridaantioksüdant, anti-angiotensiini konverteeriva ensüümi (ACE) ja hemolüüsi inhibeeriva toimegasisse vitroja antihüpertensiivne toime spontaanselt hüpertensiivsete rottide (SHR) vastusisse vivo. Näitasime, et Act, Isoact ja 6-O-atsetüülakt eemaldas tõhusalt 1,1-difenüül-2-pikrüülhüdrasüülradikaale (IC50 vastavalt 11,4, 9,48 ja 9,55 μM) ja superoksiidi radikaale (IC50 väärtusega 686,5, ja vastavalt 39,1 μM). Nagu Isoact ja 6-O-atsetüülaktil oli sarnane radikaale püüdev toime, järgmistes uuringutes kasutati ainult Acti ja Isoacti. Nii Act kui ka Isoact inhibeerisid ksantiinoksüdaasi aktiivsust IC50-ga vastavalt 53,3 ja 62,2 μM juures. Nii Act kui ka Isoact inhibeerisid oluliselt ka ACE aktiivsust ja 2,2'-aso-bis(2-amidinopropaan)divesinikkloriidi indutseeritud hemolüüsi, kuid Acti mõju oli tugevam kui Isoact. Seejärel manustasime SHR-ile suukaudselt ühe annuse Acti või Isoacti (10 mg / kg kehakaalu kohta) ja mõõtsime süstoolse vererõhu (SBP) ja diastoolse vererõhu (DBP) muutusi 24 tunni jooksul. Act, kuid mitte Isoact, näitas antihüpertensiivset toimet SBP ja DBP alandamiseks. Tulemused viitavad seaduse võimalikule kasulikkusele tervisetoidunaantioksüdantkaitse ja vererõhu reguleerimine.

Märksõnad: Akteosiid; Antihüpertensiivne aktiivsus; Angiotensiini konverteeriv ensüüm (ACE); Antioksüdant; Hemolüüs.

aktiivaine akteosiid tsistanches

SISSEJUHATUS

Akteosiid(Act), fenüületanoidglükosiid, mis sisaldab kohvhapet, 3',4'-dihüdroksüfenüületanooli, glükoosi ja ramnoosi, eraldati esmakordseltSyringa Vul- garis(Birkofer et al., 1968) ja koos struktuuriisomeerigaisoakteosiid(Isoact) ja tuletis6-O-atsetüüllakteosiid(6-O-atsetülakt), on leitud paljudes taimedes ja taimsetes ravimites, ntLigstrum purpurascens(Wong et al., 2001),Callicarpa dihhotoom(Koo jt, 2006; Lee jt, 2006),Cistanche deserticolajaBoschniakia rossica(Wu et al., 2006),Scrophularia ningpoenis(Huang et al., 2008),Rehmannia glutinosa(Li et al., 2006). Teatati, et see tegu avaldas C57BL/6 hiirte mudelites B16 melanoomi rakkudele antimetastaatilist toimet (Ohno et al., 2002). Act, Isoact ja 6-OHiljuti näidati, et -atsetülakt pärsib rakkudevahelise CAM-1 ja vaskulaarse CAM-1 IL-1 -aktiveeritud ekspressiooni inimese nabaveeni endoteelirakkudes (Chen et al., 2009). Act kaitseb ka veiste kopsude endoteelirakke hüdroksüülradikaalide poolt indutseeritud oksüdatiivse stressi eest (Chiou et al., 2004) ning pärsib lämmastikoksiidi ja TNF-i tootmist, blokeerides AP-1 aktivatsiooni lipopolüsahhariididega stimuleeritud makrofaagides (Rao et al. , 2009). Actil ja Isoactil on neuroprotektiivne toimesisse vitro(Koo jt, 2005). Koo jt. (2006) teatas, et Act ja selle aglükoonid eemaldavad tõhusalt 1,1-difenüül-2-pikrüülhüdrasüüli (DPPH) ja lämmastikoksiidisisse vitro. Siiski on vähesed uuringud seda kõrvuti võrrelnudsisse vitro antioksüdantActi ja selle struktuuriliselt seotud ühendite, nagu Isoact ja 6-O- atsetüülakt.

Hüpertensiooni ravis on kasutatud mitmeid farmakoloogilisi aineid (Mark ja Davis, 2000). Ühel antihüpertensiivsete ravimite klassil, mida nimetatakse angiotensiin I konverteeriva ensüümi (AKE) inhibiitoriteks (st peptidaasi inhibiitoriteks), on vähe kõrvaltoimeid ja see on eelistatud antihüpertensiivsete ravimite klass.

ained samaaegsete sekundaarsete haigustega patsientide ravimisel (Fotherby ja Panayiotou, 1999). ACE (peptidüüldipeptiidi hüdrolaas EC 3.4.15.1) on dipeptiidi vabastav Zn-i sisaldav eksopeptidaas, mis eemaldab dipeptiidi angiotensiin I C-otsast, moodustades angiotensiin II, väga hüpertensiivse ühendi. Mituantioksüdantpeptiididel (redutseeritud glutatiooni ja karnosiiniga seotud peptiididel) on AKE inhibeeriv toime (Hou et al., 2003). Esimene kliiniliselt saadaolev suukaudselt aktiivne AKE inhibiitor kaptopriil töötati välja hüpertensiooni raviks (Ondetti et al., 1977; Borer, 2007). On teatatud, et see tegu avaldab lämmastikoksiidi vahendatud lõõgastavat toimet SD-rottide endoteeli intaktsetele aordirõngastele (Wong et al., 2001). Ahmad et al. (1995) on teatanud, et Act indutseerib annusest sõltuva süstoolse vererõhu (SBP) ja diastoolse vererõhu (DBP) languse pärast selle intravenoosset süstimist normotensiivselt anesteseeritud Wistari rottidele. Siiski on ebaselge, kas suukaudselt manustatud Act ja/või sellega seotud isomeerid on antihüpertensiivsedsisse vivo. Käesolevas uuringus uurisimesisse vitro antioksüdantvõime ja AKE inhibeeriv toime, samutisisse vivoAct, Isoact ja/või 6- antihüpertensiivne toimeO- atsetüülakt, kasutades spontaanseid hüpertensiivseid rotte (SHR). Need uuringud peaksid andma kasulikke andmeid Acti kui tervisliku toidutoote arendamiseks.

Materjalid ja meetodid

Materjalid

2,2'-aso-bis(2-amidinopropaan)divesinikkloriid (AAPH), ACE (I ühik, küüliku kops), butüülhüdroksütolueen (BHT), DPPH, N-(3-[{{7) }}furüül]akrüloüül)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, fenasiinmetosulfaat (PMS), ksantiin ja ksantiinoksüdaas osteti ettevõttelt Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Kaptopriil osteti ettevõttest Calbiochem Co. (CA, USA). Act, Isoact ja 6-O-atsetülakt (joonis 1) osteti ettevõttelt Equal Corp. (puhtus > 98 protsenti, Shanghai, Hiina). Teised kemikaalid ja reaktiivid olid firmalt Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA).

Pühkimine tegevust kohta tegutsema, Isoact, ja 6-O- atsetülakt vastu dPPH radikaalid kõrval spektrofotomeetria

Maht (0,3 ml) Acti, Isoacti ja 6-O0,1 ml 1 M Tris-HCl puhvrile (pH 7,9) lisati atsetülakt (lõppkontsentratsioonid 1,56–50 µM), BHT ja askorbiinhape (lõppkontsentratsioonid 2,4–60 µM). ) ja seejärel segati 0,6 ml 100 uM DPPH-ga metanoolis lõppkontsentratsioonini 60 uM 20 minuti jooksul valguse eest kaitstult toatemperatuuril (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Mõõdeti neeldumise vähenemine lainepikkusel 517 nm ja väljendati kui ΔA517 nm. Tühikatsena kasutati deioniseeritud vett. DPPH-radikaali püüdmisaktiivsus (protsent) arvutati järgmise võrrandi abil: (ΔA517blank − ΔA517sample) ÷ ΔA517blank × 100. IC50 tähistab poolinhibeerimise kontsentratsiooni.

Inhibeeriv tegevust kohta seadus ja Isoact vastu ksantiin oksüdaas

Ksantiini oksüdaasi aktiivsust mõõdeti kusihappe moodustumise määramisega 295 nm juures, kasutades substraadina ksantiini (Kalckar, 1947). Erinevad Acti ja Isoacti kogused (lõplikud kontsentratsioonid olid 25, 50 ja 75 µM) eelsegati 50 µl 1 mU/mL ksantiinoksüdaasiga 4 kraadi juures 1 tund ja seejärel 300 µl 1 mM ksantiiniga. lisati. Neeldumise muutused lainepikkusel 295 nm registreeriti 2 minuti jooksul ja väljendati kui ΔA295 nm/min. Ksantiinoksüdaasi inhibeeriv aktiivsus (protsent) arvutati järgmiselt: (ΔA295 nm/min must – ΔA295 nm/min proov) ÷ ΔA295 nm/min must × 100. Pimekatsena kasutati proovilahuse asemel deioniseeritud vett. IC50 tähistab poolinhibeerimise kontsentratsiooni.

Pühkimine tegevust kohta tegutsema, Isoact, ja 6-O- atsetülakt vastu superoksiid radikaalid kõrval spektrofotomeetria

Superoksiidradikaali tekitas PMS-NA-DH süsteem (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Kõik 0,2 ml proovid, mis sisaldavad erinevas koguses Act, Isoact ja 6-O-atsetülaat (lõppkontsentratsioon oli 15,6, 31,3, 62,5, 125 ja 250 µM) lisati järjestikku 0,2 ml 630 µM nitroblue tetrasooliumile, 0,2 ml 33 uM PMS ja 0,2 ml 156 uM NADH 100 mM fosfaatpuhvris (pH 7,4). Pimekatsena kasutati proovilahuse asemel deioniseeritud vett. Positiivse kontrollina kasutati askorbiinhapet (lõppkontsentratsioon oli 6, 9, 12 ja 24 uM). Neeldumise muutused lainepikkusel 560 nm registreeriti 2 minuti jooksul ja väljendati kui ΔA560 nm/min. Superoksiidradikaalide püüdmisaktiivsus (protsent) arvutati järgmiselt: (ΔA560 nm/min must – ΔA560 nm/min proov) ÷ ΔA560 nm/min must × 100. IC50 tähistab poolinhibeerimise kontsentratsiooni.

sihikindlus kohta AcE pärssiv tegevust kohta seadus ja Isoact kõrval HPLC

Iga 50 µL Act (0.2, 0.4, 0.5 ja 2.0 µmol) ja Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 ja 2.0 µmol) segati eelnevalt 15 µL 1U/mL ACE-ga 5 minutit ja seejärel lisati 200 µl 0,5 mM FAPGG-d ja lasti reageerida toatemperatuuril 10 minutit (Anzenbacherova et al., 2001). Reaktsiooni peatamiseks lisati 800 ui metanooli. Tühikatse oli ainult FAPGG. Kontrollkatses reageeris ACE samadel tingimustel FAPGG-ga. FAPGG ja FAP kromatograafiline eraldamine viidi läbi Hitachi (Jaapan) kromatograafilises süsteemis 10 µl silmusega. HPLC analüüs viidi läbi Biosil Aqua-ODS-W 5 u kolonnis (Biotic Chemical Co., Ltd., Taiwan, 250 × 4,6 mm id), osakeste suurus 5 urn. Reageerinud segu eraldati isokraatlikult liikuva faasiga, mis koosnes 0,02 M nonüülamiinist (pH reguleeriti fosforhappega 2,4-ni) ja atsetonitriilist vahekorras 67,5:32,5 (V/V) (Anzenbacherova et al., 2001). Voolukiirus oli 1 ml/min; süstimise maht oli 10 ui; detektor oli seatud 345 nm peale. Acti ja Isoacti ACE inhibeerimised ( protsenti ) arvutati järgmiselt: [(FAPGGtühi pindala – FAPGGkontrolli pindala) – (FAPGGtühi pindala – FAPGGproovi pindala) ÷ (FAPGGtühi pindala – FAPGGkontrolli pindala) × 100.

Inhibeeriv tegevust kohta seadus ja Isoact vastu AAPH-vahendatud hemolüüs

Roti punaste vereliblede (RBC) vabade radikaalide aheloksüdatsioon AAPH-vahendatud hemolüüsi kaudu (Miki et al., 1987). Roti veri pandi hepariniseeritud tuubidesse ja tsentrifuugiti 1000 ×g10 min. Pärast kolmekordset pesemist 0,15 M NaCl-ga saadi pakitud RBC tsentrifuugimisega 1000 ×g10 min. Erinevad Acti ja Isoacti kogused (lõplikud kontsentratsioonid olid 2, 5 ja 10 µM) segati 25 µl 20% RBC suspensiooni (V/V, 10 mM PBS-is) ja 25 µl 500 mM AAPH lahust 37 kraadi juures 0. , 1, 1,5, 2, 2,5, 3 ja 3,5 tundi õrnalt loksutades. Iga segu tsentrifuugiti 1000 ×g10 minutit ja supernatanti mõõdeti lainepikkusel 536 nm. Pimekatserühmana või kontrollrühmana kasutati vastavalt AAPH lahuse või proovilahuse asemel deioniseeritud vett. Acti ja Isoacti hemolüüsi inhibeerimine (protsent) 3 tunni või 3,5 tunni pärast arvutati järgmiselt: (ΔA536 nmkontroll − ΔA536 nmsproov) ÷ ΔA536 nmkontroll × 100.

Antihüpertensiivne mõjusid kohta seadus ja Isoact peal Shr

Toitesondi (20 × 80 mm) kaudu suukaudselt manustatud Acti, Isoacti ja kaptopriili mõju vähenenud SBP-le ja vähenenud DBP-le määrati vastavalt eelmiste aruannete meetodile (Lin). et al., 2006; Lin jt, 2008; Han jt, 2011). Kõik loomkatsete protseduurid järgisid avaldatud juhiseid (National Science Council, 1994). Isased SHR-id (8 nädala vanused, National Laboratory Animal Center, Taipei) paigutati eraldi teraspuuridesse, mida hoiti 24 kraadi juures 12-tunnise valguse-pimeduse tsükliga ja neil oli vaba juurdepääs standardsele hiire/roti toidule ( Prolab RMH2500, 5P14 Diet, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) ja vesi. SHR-id jagati SBP ja DBP määramiseks juhuslikult kontroll- ja proovitöötlusteks (kuus rotti rühma kohta). Lühiajalise antihüpertensiivse katse jaoks manustati üks kord suukaudselt 0,5 ml 10 mg Acti või Isoacti/kg SHR-i või 5 mg kaptopriili/kg SHR-i ja saba vererõhku mõõdeti 2, 4, 6 ja 24 juures. h pärast ühekordset suukaudset manustamist. Pimekatses kasutati 0,5 ml destilleeritud vett. Kaudset vererõhumõõtjat (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokyo, Jaapan) kasutati SBP ja DBP mõõtmiseks neli korda iga määramise korral iga ravi korral.

andmeid analüüs

Väärtused on esitatud kui keskmised ± SD ja analüüsitud ühesuunalise ANOVA abil, millele järgneb post hoc Tukey test mitme keskmise võrdluse jaoks. Üliõpilasedt-test viidi läbi, kui võrreldi ainult kahte andmerühma (nt Act ja Isoacti sama kontsentratsiooniga). P-väärtust < 0,05="" peetakse="" statistiliselt="" oluliseks.="" statistiline="" analüüs="" viidi="" läbi,="" kasutades="" spss="" for="" windows="" versiooni="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

akteosiidin cistanche mälu parandamiseks

Tulemused

Pühkimine tegevust kohta PPH ja superoksiid radikaalid

Act, Isoact ja 6-O-atsetüülakt näitas annusest sõltuvat DPPH-d eemaldavat toimet pH väärtusel 7,9 (joonis 2). Act, Isoact ja 6- IC50 väärtused olid vastavalt 11,4, 9,48 ja 9,55 µMO- atsetüülakt. Askorbiinhappe ja BHT positiivsete kontrollide IC50 väärtused olid vastavalt 13,1 ja 18,5 uM.

Inhibeerimine kohta ksantiin oksüdaas tegevust

Näidati, et Act ja Isoact inhibeerivad annusest sõltuvat ksantiinoksüdaasi (joonis 3). Acti ja Isoacti IC50 arvutati vastavalt 53,3 ja 62,2 uM.

Inhibeerimine kohta superoksiid dismutaas tegevust

Kuna nii Act kui ka Isoact inhibeerisid ksantiini oksüdaasi aktiivsust, kasutasime superoksiidi radikaalide tekitamiseks PMS-NADH süsteemi (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). tegutsema,

Isoact ja 6-O-atsetüülakt näitas annusest sõltuvat superoksiidi radikaali püüdvat toimet (joonis 4). IC50 väärtused olid Act, Isoact ja 6- puhul vastavalt 66,0, 38,5 ja 39,1 µMO- atsetüülakt. Askorbiinhappe positiivse kontrolli IC50 väärtused olid 9,0 uM. Jooniste 2 ja 4 tulemustest oli selge, et Isoact ja 6-O-atsetülaadil oli sarnane radikaale püüdev toime DPPH ja superoksiidi radikaalide vastu ning seega valiti edasisteks bioloogilise aktiivsuse sõeluuringuteks ainult Act ja Isoact.

AcE pärssiv tegevused kohta seadus ja Isoact

Eelkatses avastasime, et Act ja Isoact häirisid ACE substraadi FAPGG ja selle hüdrolüüsitud produkti FAP neeldumist lainepikkusel 345 nm, mida kasutati pidevas spektrofotomeetrilises testis (Holmquist et al., 1979). Seetõttu kasutati AKE inhibeeriva toime jälgimiseks eraldamist koos Acti või Isoacti ja FAPGG tuvastamisega HPLC abil. Joonistel 5A kuni 5D on toodud tüüpilised HPLC kromatogrammid 10 µl pimekatse reaktsioonisegudest (ainult FAPGG, joonis 5A); kontrolltest (ACE reageeris uuesti FAPGG-ga, et tekitada FAP, joonis 5B); 0,5 µmooli Acti (312,5 µg), ACE-d ja FAPGG-d (joonis 5C); ja 0,5 µmooli Isoact (312,5 µg), ACE ja FAPGG (joonis 5D). FAPGG pindala joonisel 5B oli neljast tüüpilisest HPLC kromatogrammist madalaim ja joonisel fig 5A suurim. FAPGG alad joonistel 5C ja 5D sõltuvad Act ja Isoacti erinevate kontsentratsioonide AKE inhibeerivatest toimetest. Acti ja Isoacti arvutatud ACE inhibeerimised on näidatud joonisel 5E. See akt näitas kõrgemat AKE inhibeerivat aktiivsust kui Isoactil ja esimese IC50 oli HPLC kromatogrammidel pindala järgi 472 uM.

Inhibeeriv tegevust kohta seadus ja Isoact vastu AAPH-vahendatud hemolüüs

Acti ja Isoacti inhibeerivat toimet AAPH-vahendatud hemolüüsi vastu kontsentratsioonidel 2, 5 ja 10 uM hinnati 3,5 tunni jooksul (Miki et al., 1987). Joonise 6A tulemused näitavad, et hemolüüs roti erütrotsüütides suurenes dramaatiliselt (väljendatakse kui ΔA536 nm) pärast 3-h või 35-} h reaktsiooni AAPH-radikaalide juuresolekul (kontrollrühmadena, valge tsükli sümbol ). AAPH-radikaalide puudumisel täheldati 3{13}}tunnise reaktsiooni ajal vähest hemolüüsi või üldse mitte (tühjade rühmadena, must tsükli sümbol). Seetõttu arvutati Act ja Isoacti hemolüüsi inhibeerimine 3 tunni või 3,5 tunni pärast järgmiselt: (ΔA536 nmkontroll − ΔA536 nmsproov) ÷ ΔA536 nmkontroll × 100. Joonis 6B

näitab, et nii Act kui ka Isoact kontsentratsioonidel 2, 5 ja 10 uM inhibeerisid kontsentratsioonist sõltuvat AAPH-indutseeritud hemolüüsi, kusjuures Acti inhibeeriv toime oli igal kasutatud kontsentratsioonil oluliselt tugevam kui Isoactil.

Antihüpertensiivne mõjusid kohta seadus ja Isoact peal Shr

SHR-id manustati ühekordse suukaudse Acti ja Isoacti (10 mg/kg SHR) suukaudselt ning muutused SBP-s ja DBP-s registreeriti 24 tunni jooksul. Varem teatasime, et SHR-i vererõhk (SBP ja DBP) oli 24- h jooksul muutuv (Lin et al., 2006; Han et al., 2011). Seetõttu kasutati nullkatse ja proovi võrdlust kindlal ajal (nagu 2, 4, 6, 8 ja 24 tundi), mitte enne ja pärast suukaudset manustamist. Leiti, et Act, kuid mitte Isoact, vähendas tõhusalt SHR-i SBP-d ja DBP-d võrreldes tühja (destilleeritud vee) rühmaga. SBP vähenes Act-rühmas märkimisväärselt 2, 4 ja 6 tunni pärast, vastavalt 18,8, 16,5 ja 14,9 mmHg võrra, kuid SBP (3,3 mmHg) vähenemine 24 tundi pärast Act-ravi ei olnud sta-

kunstiliselt oluline (joonis 7A). Nagu on näidatud joonisel 7B, vähenes DBP Act rühmas 2, 4 ja 6 tunni pärast (vastavalt 8,5, 7,6 ja 12{10}} mmHg võrra), kuigi statistiliselt oli oluline ainult 6 tunni pärast saadud tulemus. (P< 0.05).="" märgiti,="" et="" actil="" ja="" kaptopriilil="" (positiivse="" kontrollina)="" oli="" sarnane="" toime="" sbp-le="" varases="" staadiumis="" (2,="" 4="" ja="" 6="" tundi)="" pärast="" suukaudset="">

akteosiidin cistanche avaldavad head mõju antioksüdantidele

ARUTELU

Aktiivsed hapniku liigid ja vabade radikaalide vahendatud reaktsioonid on seotud degeneratiivsete või patoloogiliste protsessidega, nagu vananemine, vähk, südame isheemiatõbi ja Alzheimeri tõbi (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith et al., 1996). Mitmed aruanded on keskendunud sõelumiseleantioksüdanttegevusi loodusvaradest. Käesolevas uuringus võrdlesime kõigepealtantioksüdantAct, Isoact ja 6- tegevusedO-atsetülaat. Act ja Isoact on struktuursed isomeerid, milles kofeiinhappe fragmendi koostisosa on esimeses seotud glükoosi C-4 hüdroksüülrühmaga ja teises glükoosi C-6 hüdroksüülrühmaga. Kui ramnoosi ja 3',4'-dihüdroksüfenüületanooli komponendid on vastavalt seotud glükoosiosa C-3 ja C-1 hüdroksüülrühmadega samas Acti ja Isoacti molekulis, { {8}}O-atsetüülakt on akti derivaat, milles äädikhape on seotud glükoosiosa C-6 hüdroksüülrühmaga (joonis 1). Koo jt. (2006) teatasid, et Actil ja selle aglükoonidel oli DPPH-d siduv toime ning nende tegevuste järjekord (väljendatud kui IC50) oli Act (1,28 µM) > kofeiinhape (2,22 µM) > 3',4'-dihüdroksüfenüületanool ( 7,72 uM) > -tokoferool (15,1 uM). Käesolevas aruandes (joonis 2) on DPPH eemaldamise tegevuste järjekord (väljendatud kui IC50) 6-O-atsetülaat (9,55 uM) ≈ Isoact (9,48 uM) > Act (11,4 uM). Need väärtused olid DPPH-radikaalide eemaldamisel võrreldavad või paremad kui askorbiinhappe (IC50 13,1 uM) ja BHT (IC50 18,5 uM) väärtustega. Acti kõrgem IC50 käesolevas aruandes võib tuleneda DPPH lõppkontsentratsioonist 60 µM Koo et al. kasutatud 30 µM asemel. teatatud (2006). Kuna DPPH radikaal kuulub väidetavalt elektronide ülekandereaktsiooni (Huang et al., 2005), siis oletatakse, et glükoosiosa C-6 hüdroksüülrühma derivaat, näiteks atsetüülrühm {{21} }}O- Isoactis olev atsetülaat ja kofeiinhape võivad DPPH eemaldamise testi jaoks kergemini läbi viia elektronide ülekandereaktsiooni kui C-6 vaba hüdroksüülrühm Acti glükoosirühmas.

Tegutse, 6-O-atsetülaadil ja Isoactil on teatatud superoksiidi siduva toimega in vitro, kasutades superoksiidi radikaalide tekitamiseks ksantiini/ksantiini oksüdaasi süsteemi (Wang et al., 1996; Gao et al., 1999). Kuid meie käesolev uuring näitas, et Actil oli ksantiinoksüdaasi inhibeeriv toime (joonis 3). Seetõttu genereeriti superoksiidradikaal, kasutades käesolevas aruandes PMS-NADH süsteemi (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008) ksantiini/ksantiini oksüdaasi süsteemi asemel. Tõepoolest, kasutades ksantiini/ksantiini oksüdaasi süsteemi superoksiidi radikaalide tekitamiseks, Wang et al. (1996) saavutasid IC50 63 uM akti superoksiidi radikaalide vastu ja see väärtus on lähedane ksantiini oksüdaasi aktiivsuse inhibeerimise väärtusele Actiga, nagu on kirjeldatud käesolevas uuringus (53,3 uM). Teatati, et kofeiinhappel oli ksantiinoksüdaasi inhibeeriv toime (Chiang et al., 1994). Võib oletada, et mõnede kofeiinhapetega seotud struktuuridega fütokemikaalide, nagu Act või Isoact (Wang et al., 1996; Gao jt, 1999) ksantiini/ksantiini oksüdaasi genereerivat süsteemi kasutav superoksiidi püüdmine võib omada. on vähemalt osaliselt kaasa aidanud ksantiinoksüdaasi inhibeerimisele. Huvitaval kombel Wang et al. (1996) leidsid, et Act (0,5 ja 2,5 mM) ei inhibeerinud ksantiini oksüdaasi aktiivsust, mis määrati hapnikuelektroodiga hapnikutarbimise jaoks ksantiini oksüdatsiooni ajal. Seega on oluline meeles pidada, et superoksiidi siduva aktiivsuse testimise erinevad meetodid võivad anda vastuolulisi andmeid.

Li et al. (1993) on teatanud Act ja Isoacti sarnasest inhibeerimisest AAPH-vahendatud hemolüüsi vastu hiirte erütrotsüütides. Siiski näitasime siin, et Actil oli palju suurem inhibeeriv toime AAPH-indutseeritud hemolüüsi vastu rottide RBC-s kui Isoactil (joonis 6). On ebaselge, kas selline ebakõla võis olla tingitud näriliste liikide erinevusest.

Kang et al. (2003) teatasid, et Actil oli AKE inhibeeriv toime ja IC50 oli 373,3 µg/ml, mis arvutati 598 µM, kasutades substraatidena Hip-His-Leu. Käesolevas aruandes näitas seadus kõrgemat AKE inhibeerivat toimet kui Isoact ja esimese IC50 oli HPLC kromatogrammidel pindala järgi 472 uM (joonis 5). On teatatud, et see tegu avaldab lämmastikoksiidi vahendatud lõõgastavat toimet SD-rottide endoteeli intaktsetele aordirõngastele (Wong et al., 2001). Kuigi Actil on Wistari rottidel antihüpertensiivne toime,

uuringus kasutati Acti intravenoosset süstimist anesteseeritud rotile, et välistada adsorptsioonifaktor (Ahmad et al., 1995). Siin manustasime Acti SHR-idele suuliselt ja määrasime vererõhu muutused. Leidsime, et suukaudse manustamise fakt, kuid mitte Isoact, avaldas antihüpertensiivset toimet, vähendades SBP ja DBP 24 tunni jooksul pärast ühekordset manustamist (joonis 7). Actil annuses 10 mg/kg kehakaalu kohta oli SBP alandamisel lähedane kaptopriili toimele annuses 5 mg/kg SHR ja see oli DBP alandamisel parem kui kaptopriil.

Kokkuvõttes Act eksponeeritudantioksüdantaktiivsus, AKE inhibeeriv toime ja antihüpertensiivne toime SHR-idele. Siin esitatud tulemused aitavad tulevikus välja töötada taimseid ravimeid või nendega seotud tooteid, kasutades seadust, mida on leitud paljudes taimedes ja taimsetes ravimites, et tagada tulevikus antioksüdantide kaitse ja ravitoime.

Cistancheakteosiidantioksüdatsiooni ja vananemisvastaseks toimeks

1 Taichungi riikliku Chung Hsingi ülikooli toiduteaduse ja biotehnoloogia osakond

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Taiwan

3 Farmaatsia kool, Taipei Meditsiiniülikool, Taipei, Taiwan

4 Biomeditsiiniliste materjalide ja tehnika instituut, Taipei Meditsiiniülikool, Taipei, Taiwan

5 Traditsioonilise taimse meditsiini uurimiskeskus, Taipei meditsiiniülikooli haigla, Taipei, Taiwan

6 Farmakognoosiainstituut, Taipei Meditsiiniülikool, Taipei, Taiwan

(Saadud 12. märtsil 2012; vastu võetud 20. aprillil 2012)

TSITEERITUD KIRJANDUS

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani ja SP Ahmad. 1995. aasta.Akteosiid: uus antihüpertensiivne ravim. Fütoter. Res. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Dieedi kantserogeenid ja antikantserogeenid: hapnikuradikaalid ja degeneratiivsed haigused. Science 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacher, K. Macek ja J. Kvetina. 2001. Ensüümide (angiotensiin konvertaasi) inhibiitorite määramine ensümaatilise reaktsiooni põhjal, millele järgneb HPLC.J. Farmaatsia. Biomed. Anal. 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser ja U. Thomas. 1968. aastal.Akteosiidja neoakteosiid: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc- riputatud 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Angiotensiini konverteeriva ensüümi inhibeerimine: märkimisväärne edusamm südame-veresoonkonna haiguste ravis. Eur. Heart J. Suppl. 9 (lisa E): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang ja ML Hu. 2009.Akteosiidja 6-O-atsetüüllakteosiid vähendavad IL-i-1 poolt indutseeritud raku adhesioonimolekule, inhibeerides inimese veresoonte endoteelirakkudes ERK ja JNK. J. Agric. Toit

Chem. 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo ja FJ Lu. 1994. Ksantiini oksüdaasi inhibiitorid Alsophila spinulosa (Hook) Tryoni lehtedest. J. Ensüümi inhibeerimine. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin ja CF Chen. 2004.Akteosiidkaitseb endoteelirakke vabade radikaalide poolt põhjustatud oksüdatiivse stressi eest. J. Pharm. Pharmacol. 56: 743-748.

Fotherby, MD ja B. Panayiotou. 1999. Antihüpertensiivne ravi insuldi ennetamisel: mida, millal ja kellele? Narkootikumid 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi ja M. Nukina. 1999. Fenüülpropanoidglükosiidide radikaalne eemaldamine Caryopteris incanas. Biosci. Biotehnoloogia. Biochem. 63: 983-988.

Gey, KF 1990. Theantioksüdantsüdame-veresoonkonna haiguste hüpotees: epidemioloogia ja mehhanismid. Biochem. Soc. Trans. 18: 1041-1045.428 Botanical Studies, kd. 53, 2012

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu ja WC Hou. 2011. Töödeldud küüslaugu antihüpertensiivne toime spontaanselt hüpertensiivsetel rottidel ja hüpertensiivsetel inimestel. Bot. Stud. 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning ja JF Riordan. 1979. Angiotensiini konverteeriva ensüümi pidev spektrofotomeetriline analüüs. Anal. Biochem. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen ja YH Lin. 2003. Angiotensiini konverteeriva ensüümi inhibeeriva toimega antioksüdantsed peptiidid ja rakendused angiotensiini konverteeriva ensüümi puhastamiseks. J. Agric. Food Chem. 51: 1706-1709.

Huang, D., B. Ou ja RL Prior. 2005. Keemia tagaantioksüdantmahuanalüüsid. J. Agric. Food Chem. 53: 1841-1856.

Huang, CG, YJ Shang, J. Zhang, JR Zhang, WJ Li ja BH Jiao. 2008. Fenüülpropanoidglükosiidide hüpourikeemiline toimeakteosiidScrophularia ningpoenis'e uurimine seerumi kusihappe taseme kohta kaaliumoksonaadiga eelnevalt töödeldud hiirtel. Amer. J.

Lõug. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee ja YC Kim. 2006.AkteosiidCallicarpa dichotoma nõrgendab skopolamiinist põhjustatud mäluhäireid. Biol. Pharm. Bull. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu ja Z. Jia. 1993. Pedicularise fenüülpropanoidglükosiidide kaitse oksüdatiivse hemolüüsi vastu in vitro. Planta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang ja ZB Hu. 2006. HPLC määramineakteosiidaastal Radix Rehmanniae. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu ja WC Hou. 2008.Antioksüdant, semikarbasiidi suhtes tundlik amiini oksüdaas ja Phyllanthus urinariast eraldatud geraniiini antihüpertensiivne toime. Food Chem. Toksikool. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin ja WC Hou. 2004. Asparagiinhappe ja glutamiinhappe monohüdroksamaadidantioksüdantja angiotensiini konverteeriva ensüümi inhibeerivad toimed. J. Agric.Food Chem. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Puriiniühendite diferentsiaalne spektrofotomeetria spetsiifilise ensüümi abil. J. Biol. Chem.167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee ja HS Lee. 2003. Angiotensiini konverteeriva ensüümi inhibeerivad fenüülpropanoidglükosiidid Clerodenron trichotomum'ilt. J. Ethnopharmacol. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee ja YC Kim. 2005. Callicarpa dichotoma fenüületanoidglükosiidide in vitro neuroprotektiivne tegevus. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh ja YC Kim. 2006.Akteosiidja selle aglükoonid kaitsevad roti kortikaalsete rakkude primaarseid kultuure glutamaadi indutseeritud eksitotoksilisuse eest. Life Sci. 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin ja WC Hou. 2006. Jami (Dioscorea alata cv. Tainong nr 1) ja selle peptiliste hüdrolüsaatide mõju spontaanselt hüpertensiivsetele rottidele. J. Sci. Toidupõllumajandus. 86: 1489-1494.

Mark, KS ja TP Davis. 2000. Insult: arendamine, ennetamine ja ravi peptidaasi inhibiitoritega. Peptiidid 21:1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto ja E. Niki. 1987. Roti punaste vereliblede vabade radikaalide ahela oksüdatsioon molekulaarse hapniku poolt ja selle inhibeerimine -tokoferooliga. Arch Biochem. Biophys. 258: 373-380.

Riiklik Teadusnõukogu. 1994. Laboratoorsete loomade hooldamise ja kasutamise juhend. Taiwani riiklik teadusnõukogu.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara ja I. Saracoglu. 2002. Anti-metastaatiline aktiivsusakteosiid, fenüületanoidglükosiid.Biol. Pharm. Bull. 25: 666-668.

Vendetti, MA, B. Rubin, DW Cushman. 1977. Angiotensiini konverteeriva ensüümi spetsiifiliste inhibiitorite väljatöötamine: uus suukaudselt aktiivsete antihüpertensiivsete ainete klass. Teadus 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh ja YM Tzeng. 2009. Anisomeles India koostisosad ja nende põletikuvastane toime. J. Ethnopharmacol. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal ja N. Kowal 1996. Alzheimeri tõve oksüdatiivne kahjustus. Nature 382: 120-121. Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao ja Z. Jia.

1996. Pedicularis'e fenüülpropanoidglükosiidi eemaldav toime superoksiidi anioonile ja hüdroksüülradikaalile spin-püüdmismeetodil. Biochem. Pharmacol. 51: 687- 691.

Wong, IYF, Y. Huang, ZD He, CW Lau ja ZY Chen. 2001. Ligstrum purpurascens ekstrakti lõõgastav toime ja puhastatudakteosiidroti aordirõngastes. Planta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung ja TH Tsai. 2006. MääramineakteosiidCistanche deserticola ja Boschniakia rossica puhul ning selle farmakokineetika vabalt liikuvatel rottidel, kasutades LC-MS/MS. J. Chromatogr. B 844: 89-95.